抗体技术是现代生命科学中一项不可或缺的技术，它在基因研究、蛋白质的结构与功能研究和免疫学诊断等方面起着至关重要的作用。Kohler和Milstein等于1975年利用杂交瘤技术将骨髓瘤细胞同产生抗体的B淋巴细胞融合，成功的建立了单克隆抗体制备技术。而后单克隆抗体技术的又一项重要技术，基因工程抗体技术，其代表是1994年Winter等创造建立的噬菌体抗体库技术。基因工程抗体主要包括两种，一是对已有单克隆抗体进行人源化基因工程改造得到抗体，另一种是通过抗体库技术得到的完全人源化抗体。目前，基因工程抗体已在疾病预防、诊断、治疗等方面广泛应用。本实验将通过偶联P24抗原的磁珠分选特异性分泌P24抗体的B细胞，有限稀释后，提取总mRNA，采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因，经测序鉴定后克隆到真核表达载体中；通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体；使用proteinA亲和层析纯化抗体。使用该方法，建立起新型人源化单克隆抗体制备技术平台。然后将此方法用于抗EV71VP1的人源单克隆抗体的制备，使用耦联EV71VP1抗原的磁珠对手足口病人血进行特异性细胞分选，得到分泌EV71VP1特异性抗体的B淋巴细胞。同样，有限稀释后，提取总mRNA，采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因，经测序鉴定后克隆到真核表达载体Cloning vector AbVec-hIgG1、Cloning vector AbVec-hIgKappa、Cloning vectorAbVec-hIgLambda中。通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体。结果，成功筛选到5对抗HIV-1P24的人源单克隆抗体基因和1对抗EV71VP1的人源单克隆抗体基因，并纯化出2例有效的抗HIV-1P24抗体。本研究初步成功地建立了人源化单克隆抗体的筛选方法，为HIV、EV71早期诊断以及筛选其他人源化单克隆抗体奠定了基础。