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猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原，是一种新发现的病毒，它可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡，与仔猪A2型先天性震颤(AⅡ，CT)、怀孕母猪流产、成年猪皮炎肾炎综合征(PDNS)和呼吸道疾病综合征(PRDS)有关。PMWS主要感染断奶仔猪和育肥猪，1991年首先在加拿大西部发现，目前已遍布世界各地。更为严重的是PCV2可同时侵害猪的免疫系统，导致猪的免疫机能下降，造成其它疾病的大暴发，引起其他各种病原的继发感染，造成的间接损失难以估计，PCV2已经成为严重阻碍我国养猪业发展的主要病原之一。目前对于该病毒的防制主要是依靠疫苗，而由于该病毒在细胞上增殖滴度很低，发展传统的灭活疫苗和弱毒疫苗非常困难，因此，研制安全、高效、廉价的新型疫苗已成为越来越多研究者关注的焦点。
本研究针对PCV2免疫抑制性问题，用腺病毒载体表达PCV2 ORF2和猪y干扰素融合基因，并通过动物实验探讨了其重组腺病毒的免疫原性，为进一步研究猪圆环病毒基因工程疫苗奠定了基础。
1 重组腺病毒转移载体pShuttle-CMV-ORF2-γ-IFN的构建以P-ORF2，P-γ-IFN为模板，根据GenBank上已发表的猪PCV2 ORF2基因序列及猪IFN-γ基因序列，应用Primer5.0设计了2对引物，其中一对引物P1，P2用于猪圆环病毒2型ORF2-1inker基因的扩增，另一对引物P3，P4则用于linker-γ-IFN基因的扩增。再以所扩增的两段基因为模板，P1，P4为引物扩增融合基因。通过(Gly4Ser)3接头连接融合基因ORF2-γ-IFN。将所扩增的融合基因连接pMD18T-Simple Vector，经PCR方法，限制性内切酶酶切法及测序证明该融合基因已成功转入重组质粒中(命为pMD18T-ORF2-γ-IFN）。腺病毒转移载体pShuttle-CMV和pMD18T-ORF2-γ-IFN经双酶切后再切胶回收并连接后，经PCR方法和限制性内切酶酶切法及序列测定证明两基因已成功连接，由此获得了重组腺病毒转移载体pShuttle-CMV-ORF2-γ-IFN。
2 重组腺病毒rAd-ORF2-γ-IFN的包装和鉴定重组腺病毒转移载体pShuttle-CMV-ORF2-γ-IFN经Pmel酶切线性化，碱性磷酸酶处理后，在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-ORF2-γ-IFN。经PCR方法和PacI酶切鉴定后，序列测定表明该重组腺病毒载体己得到成功构建。PacI酶切线性化pAd-ORF2-γ-IFN,脂质体法转染AD293细胞扩增得到重组腺病毒rAd-ORF2-γ-IFN。收集病变的细胞，PCR，RT-PCR，IFA，Western-blot及SwineIFN-γELISA试剂盒检测融合基因及其表达，三次噬斑实验纯化重组腺病毒，测得其TCID50是10-8.899/0.1ml稀释的病毒液。结果表明本研究成功地研制了重组腺病毒rAd-ORF2-γ-IFN.
3 动物实验将6-8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为四组，第一组肌肉注射重组腺病毒rAd-ORF2-γ-IFN，第二，三组肌肉注射重组腺病毒rAd-ORF2和野生型腺病毒(wtAdV)，第四组肌肉注射PBS作为对照。免疫两次，间隔2周。断尾采血，ELISA法测定PCV2特异性抗体，并取小鼠脾脏通过MTT法进行淋巴细胞增殖试验。结果显示：免疫组的小鼠血清能够检测到较高水平的PCV2特异性抗体水平，且在二免后28天（即首免后42天）其特异性抗体水平达到最高值，对照组rAd-ORF2也可产生特异性抗体，但永平较实验组低，且在二免后，抗体水平上升不明显。与PBS对照组比较，野生型腺病毒对照组的OD值相对较高，这与野生型腺病毒本身对机体免疫系统具刺激作用有关。但实验组及对照组均不能使免疫小鼠的淋巴细胞转化值增高。