【摘 要】
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目的构建牛乳铁多肽（Lactoferricin B）的真核表达质粒pYES2／Lactoferricin B，实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达，初步检测其不同变异的体外抗菌活性。方法通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列，让其互为模板、引物进行PCR扩增，得到Lactoferricin B与几种变异的基因序列。将它们克隆到穿梭质粒pYES2中，构建重组质粒
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目的构建牛乳铁多肽（Lactoferricin B）的真核表达质粒pYES2／Lactoferricin B，实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达，初步检测其不同变异的体外抗菌活性。方法通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列，让其互为模板、引物进行PCR扩增，得到Lactoferricin B与几种变异的基因序列。将它们克隆到穿梭质粒pYES2中，构建重组质粒pYES2／Lactoferricin B等，转化到大肠杆菌Top10中，让其大量增殖。提取目的质粒经纯化后将转化到S.cerevisiae中，通过营养缺陷型筛选获得重组酵母菌并通过半乳糖诱导使其表达目的蛋白。经离子交换柱纯化收集目的蛋白后，通过体外抑菌实验比较其抗菌活性。结果提取含该片段的重组质粒经PCR扩增检验、DNA测序表明，所得几种质粒分别包含了Lactoferricin B与几种变异的基因序列，即成功构建了目的载体。提取诱导后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及质谱检测，证实目的蛋白的存在。抑菌实验初步检测目的蛋白具有一定的体外抑菌活性。结论构建了重组质粒pYES2／Lactoferricin B等，能够在S.cerevisiae中诱导表达，获得分子量约为3.4KD的Lactoferricin B重组蛋白，为进一步研究其生物功能及抗菌活性提供了帮助。
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