论文部分内容阅读
目的:探讨高三尖杉酯碱与蒽环类药物阿霉素联用时对白血病细胞的增殖,凋亡的影响及作用机制。方法:1.根据单独给药和联合给药方式,将高三尖杉酯碱,阿霉素处理K562细胞及HUVEC细胞后,MTT实验分析出各组药物不同作用时间后的细胞抑制率和IC50浓度,并做统计学分析。2.Annexin V-PE/7-AAD双染法流式细胞术实验检测高三尖杉酯碱单药,阿霉素单药以及高三尖杉酯碱联合阿霉素作用于K562细胞,HUVEC细胞后细胞凋亡情况。3.使用Western blot法检测高三尖杉酯碱,阿霉素及高三尖杉酯碱联合阿霉素联合对K562细胞中PARP,RIP1及Caspase3表达的影响。结果:1.MTT实验结果显示高三尖杉酯碱,阿霉素以及高三尖杉酯碱+阿霉素对K562和HUVEC细胞的增殖均有抑制作用(P<0.05,n=6),且有浓度依赖性。当联合用药时,相对于HUVEC细胞,对K562细胞的增殖抑制作用更强(P<0.05,n=6)。2、高三尖杉酯碱及阿霉素均可诱导K562细胞凋亡,有浓度依赖性(P<0.05,n=6);高三尖杉酯碱联合阿霉素作用于K562细胞,其凋亡率随着药物浓度的增加和时间的延长有显著提升,表现出浓度及时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05,n=6)。3、Western blot实验结果显示,高三尖杉酯碱处理K562细胞24小时后各浓度组cleaved-PARP蛋白的表达量较对照组有明显的上调趋势;在100倍高三尖杉酯碱处理组中active-Caspase3蛋白明显出现表达;阿霉素处理K562细胞24小时后,各浓度药物处理组中cleaved-PARP蛋白的表达量均呈上调趋势,active-Caspase3和RIP1均表达阴性。高三尖杉酯碱联合阿霉素作用于K562细胞24小时后,IC50浓度阿霉素组中active-Caspase-3和RIP1表达明显上调,其他各单药组和联合用药组中RIP1均为表达阳性,active-Caspase-3蛋白表达量明显较100×HHT组高。结论:1.高三尖杉酯碱、阿霉素以及高三尖杉酯碱联合阿霉素均可抑制K562细胞和HUVEC细胞增殖。高三尖杉酯碱联合阿霉素用药时对K562细胞的抑制作用较对HUVEC细胞强。2.高三尖杉酯碱及阿霉素均可诱导K562细胞凋亡,高三尖杉酯碱联合阿霉素时对K562细胞的凋亡增强并可诱导坏死性凋亡。3.高三尖杉酯碱及阿霉素均可通过诱导PARP降解促进K562细胞凋亡,且呈浓度依赖性;高浓度HHT可使active-Caspase-3表达,同时IC50浓度HHT联合阿霉素可使active-Caspase-3增高及使RIPI表达呈阳性,提示该浓度组合可促进K562细胞发生凋亡及坏死性凋亡。