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目的:为研究Ang-1对胃癌细胞侵袭能力有无影响,我们以腺病毒为载体,将Ang-1基因转染至人胃癌细胞BGC-823,研究过表达Ang-1的人胃癌细胞BGC-823中uPA和MMP-2的表达情况,并了解胃癌侵袭能力及可能机制。
方法:利用腺病毒作为载体将已构建成功的含Ang-1基因的重组腺病毒(Ad-Ang-1)瞬时转染人胃癌细胞BGC-823,转染编码绿色荧光蛋白的复制缺陷型腺病毒重组体(Ad-GFP)为平行对照,未转染的正常细胞为空白对照,采用Transwell小室检测细胞的侵袭能力;采用RT-PCR检测三组细胞中MMP-2和uPA在mRNA水平表达的情况;采用Western blot检测三组细胞中MMP-2和uPA在蛋白水平表达的情况;采用ELISA检测三组细胞中培养上清和细胞中uPA的含量;采用Millicell小室检验细胞的迁移能力。
结果:Millicell小室和Transwell小室结果显示Ad-Ang-1组细胞的迁移和侵袭能力与其他两组比较均明显提高,差异有显著性,而Ad-GFP组和空白对照组比较差异无显著性;RT-PCR和Western blot结果显示MMP-2和uPA在Ad-Ang-1组中mRNA和蛋白水平表达明显高于Ad-GFP组和空白对照组(P<0.05);ELISA结果显示Ad-Ang-1组胃癌细胞培养上清和细胞中uPA蛋白的含量明显高于Ad-GFP组和空白对照组(P<0.05)。
结论:过表达Ang-1的胃癌细胞迁移和侵袭能力均明显提高,Ang-1基因能够显著提高人胃癌细胞BGC-823中MMP-2和uPA mRNA和蛋白水平的表达,提示Ang-1可能通过上调MMP-2和uPA来促进肿瘤细胞侵袭的作用。