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动物脂肪沉积是脂肪细胞数量增加、体积增大以及脂滴聚集的结果。近年来的研究表明,脂肪组织不仅是机体能量储存的场所,同时也能分泌诸如抵抗素(resisitin)、瘦素(leptin)、肿瘤坏死因子a(TNF-a),白细胞介素6(IL-6)等多种脂肪细胞因子(adipocytokines)调节机体能量代谢调节。本研究旨在探讨抵抗素对猪前脂肪细胞代谢、增殖与分化的影响及其与胰岛素、胰高血糖素的相互关系。
1、取1~7日龄新生仔猪颈部皮下脂肪组织,利用胶原酶消化法获取猪前脂肪细胞,于37℃、5%CO2、饱和湿度下进行原代培养,通过MTT法,油红O染色以及测定细胞内脂蛋白脂酶活性鉴定猪前脂肪细胞。结果显示,猪前脂肪细胞数量呈指数增长,于分化第3天细胞内开始充脂,此后充脂程度逐渐加剧,细胞形态由原始的成纤维细胞样演变为圆形的细胞形态,同时,细胞内脂蛋白脂酶的活性呈现出先上升后下降的变化趋势。由此可见,采用胶原酶法获得的细胞符合前脂肪细胞的特征。
2、为了探讨重组抵抗素水平对前脂肪细胞增殖与分化的影响,将原代培养猪前脂肪细胞随即分为5组,分别在含10%小牛血清的DMEM/F12培养基中加入0、50,100,150,200ng/mL的重组抵抗素。通过形态学观察以及测定细胞内甘油三酯含量和脂蛋白脂酶活性等方法评定前脂肪细胞的增殖与分化情况。结果表明,100ng/mL抵抗素能显著促进猪前脂肪细胞的增殖,随着重组抵抗素的剂量增加,这种促增殖作用有减弱的趋势。重组抵抗素同样能促进前脂肪细胞分化,但这种促分化作用随着重组抵抗素的剂量的增加而增强,细胞的充脂程度越强。
3、采用六因素三水平正交试验设计(有交互作用),通过MTT法,油红O染色,测定细胞内甘油三酯含量以及脂蛋白脂酶活性来评估重组抵抗素,胰岛素以及胰高血糖素的交互作用对猪前脂肪细胞增殖与分化的影响。结果表明,100ng/mL重组抵抗素与150nmol/L胰岛素相互作用对前脂肪细胞的增殖具有显著性作用,并且显著提高细胞内脂蛋白脂酶的活性,并且这种促进作用均强于两者各自单独作用时所产生的影响;而100ng/mL重组抵抗素与300nmol/L的胰岛素相互作用则能显著促进前脂肪细胞的分化,刺激细胞内甘油三酯的合成代谢。本研究未观察到胰高血糖素对猪前脂肪细胞增殖和分化的作用,但胰高血糖素能促进甘油三酯的分解代谢,抑制脂蛋白脂酶活性。
本研究结果表明,抵抗素在调节猪前脂肪细胞代谢、增殖与分化中发挥了重要作用,前脂肪细胞增殖的数量、分化的时机可能与胰岛素和抵抗素的相互作用有关。