基于核酸适配体的氧氟沙星检测方法研究

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氧氟沙星是人工合成的氟喹诺酮类抗生素,广泛用于治疗人和动物的细菌性感染。由于其不完全代谢和不合理使用,易在环境中造成残留和细菌耐药性,对人类健康和生态环境构成严重威胁。传统的检测方法虽然有较高灵敏度和准确性,但对仪器设备要求高、前处理较为复杂,整个检测过程比较耗时,无法满足实时快速检测的要求。因此本课题基于氧氟沙星特异性核酸适配体,通过不同的信号输出方式,探索了三种简便、快速、成本低、灵敏度和准确性高的氧氟沙星检测方法。(1)基于核酸适配体的聚集纳米金比色法检测氧氟沙星。基于氧氟沙星和核酸适配体之间的相互作用,以及AuNPs在盐溶液中聚集和分散状态带来的吸光度和颜色的变化,通过颜色和吸光度变化就可以定性和定量检测,方法具有较高的特异性,最低检测限为3.38 nM,线性范围为20~400 nM,在环境或生物样品中有着较好的回收率。但是,这种方法的灵敏度仍不足。(2)基于核酸适配体的纳米金淬灭罗丹明B荧光法检测氧氟沙星。在比色法基础上添加荧光染料放大检测信号,体系依靠游离分散的纳米金可以淬灭RhoB的荧光引起体系荧光值的减少,而聚集的纳米金不会淬灭荧光,从而产生荧光的差异。检测体系信号得到放大,最低检测限为1.52 nM,线性范围为1.52-200 nM,在自来水和河水中有着较好的回收率,但是其特异性却有所下降,直观可见度不如比色检测。(3)基于核酸适配体的SYBR GreenⅠ荧光法检测氧氟沙星。对荧光法进一步优化,引入SYBR Green I染料,通过有无氧氟沙星的情况下,导致的核酸适配体构象的改变,从而产生的荧光强度的变化。方法的特异性良好,最低检测限为0.34 nM,线性范围为0.34-200 nM。方法更简便,步骤更简单,检测时间更短,在自来水、河水和人工尿液中都获得了较好的回收率,可应用于实际水样的快速检测。
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