丝素纤维与外周神经组织的体外生物相容性研究

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第一部分丝素纤维与背根神经节的体外组织相容性研究目的:本实验旨在研究丝素纤维与背根神经节的体外组织相容性,初步探讨丝素纤维作为修复周围神经损伤桥接物的可行性。方法:取新生1-2天SD大鼠背根神经节(DRG)与丝素纤维共培养21天,培养过程中每天倒置显微镜观察,分别在培养4天、7天时拍照,并进行扫描电镜、免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察,培养21天标本透射电镜观察。结果:通过光镜、电镜观察,发现背根神经节与丝素纤维共培养4天后,有大量的细胞从背根神经节中爬出,并沿着丝素纤维向远处迁移;培养7天则可看到更多细胞从组织块爬出,缠绕并层层包裹丝素纤维。免疫细胞化学染色及扫描电镜形态观察,提示这一类细胞主要为雪旺氏细胞。培养21天,透射电镜下可见丝素纤维周围的细胞突起伸入到神经轴突间,部分或全部包绕轴突,同时,细胞内部结构未见异常。结论:雪旺氏细胞从背根神经节中爬出,并沿着丝素纤维包裹生长,提示丝素纤维与背根神经节组织具有较好的相容性。第二部分丝素浸出液对雪旺氏细胞的影响目的:研究丝素浸出液对雪旺氏细胞生长、增殖及部分细胞功能的影响,以判断丝素材料对雪旺氏细胞是否存在毒性作用,为其能否作为生物材料应用于外周神经修复作进一步探讨。方法:取1-2天新生SD大鼠坐骨神经,获得生长旺盛的雪旺氏细胞,光镜观察在丝素浸出液中生长雪旺氏细胞的形态变化,并在培养24h、48h、72h拍照;MTT法检测雪旺氏细胞在丝素浸出液中生长12h、24h、48h、72h及7天后的细胞活力;流式细胞仪检测雪旺氏细胞浸出液中培养24h后细胞周期变化及S100阳性细胞比例;RT-PCR检测丝素浸出液中培养12h、24h、48h后雪旺氏细胞表达NGF、BDNF及S-100蛋白mRNA的变化;Western Blot及免疫细胞化学染色检测浸出液中生长24h、48h及72h雪旺氏细胞表达NGF、BDNF及S-100蛋白变化。结果:光镜下观察雪旺氏细胞在丝素浸出液中培养24h、48h、72h,其形态与普通培养基中生长的细胞无显著差别;MTT检测结果显示浸出液中生长12h、24h、48h、72h及7d,细胞活力没有发生明显改变;细胞周期检测提示细胞周期各期雪旺氏细胞的比例没有受丝素浸出液的影响;RT-PCR、Western Blot、免疫组织化学染色结果提示浸出液中雪旺氏细胞表达NGF、BDNF及S-100 mRNA及蛋白表达量与普通培养基中生长的雪旺氏细胞相比没有显著差异。结论:雪旺氏细胞在丝素浸出液中生长没有观察到形态改变;也未发现细胞活力及分裂增殖能力变化;细胞表达NGF、BDNF及S-100蛋白等这些对于神经修复具有重要意义的蛋白表达能力没有发生明显改变,提示丝素纤维对雪旺氏细胞没有毒性作用。
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