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水稻白叶枯病菌Xoo(Xanthomonas oryzfae pv.oryzae,Xoo)能利用Ⅲ型分泌系统T3SS(Typethreesecretionsyetem)向细胞外分泌效应因子,从而表现出水稻白叶枯病菌的毒性。转位子是Ⅲ型分泌系统的重要组分,位于Ⅲ型分泌系统装置顶端,通常由两个疏水性转位子蛋白和一个亲水性转位子蛋白组成。有研究显示,水稻白叶枯病菌Xoo的亲水性转位子蛋白Hpa1xoo和疏水性转位子蛋白HrpFxoo是Ⅲ型分泌系统的重要组分,它们影响着水稻白叶枯病菌PX099A在水稻上的致病性。因此使用GAL4和膜酵母双杂交系统验证Hpa1xoo和HrpFxoo两者间是否存在直接互作,结果表明,两种蛋白之间并不存在直接互作。设计实验将hpa1和hrpF基因分别连接到表达载体pHM1上,并在设计hpa1引物时加上flag标签,在设计hrpF引物时加上his标签,通过Western bloting实验显示蛋白表达正确。之后分别通过Hpa1-Flag蛋白和HrpF-His蛋白在PXO99A总蛋白中进行免疫共沉淀(CO-IP)实验,然后将免疫沉淀的互作结合蛋白样品送公司进行质谱鉴定。Hpa1-Flag样品在PX099A总蛋白中筛选到了 24种互作蛋白,HrpF-His样品在PX099A总蛋白中筛选到了 64种互作蛋白,其中包括Ⅲ型分泌系统效应蛋白XopN,后续进一步验证XopN对水稻白叶枯病菌致病性的影响。水稻白叶枯病菌胞外蛋白Xops(Xanthomonas outer proteins)是Xoo利用Ⅲ型分泌系统泌出到细胞外的一类蛋白质。XopN即为Xop蛋白的一种,是Xoo中Ⅲ型分泌系统的一个效应因子。目前XopN在水稻白叶枯病菌PX099A上的功能还未知。本研究采用同源交换方法敲除PXO99A菌株中的XopN基因,获得PX099A△XopN突变体菌株,在突变体菌株上回补XopN基因获得C-XopN回补菌株。通过对PX099AAXopN菌株的生长速度测定、致病力测定、过敏反应测定来研究XopN的病理功能。结果显示,缺失了 XopN的菌株在NB培养液中生长速度要小于野生型PX099A菌株的生长速度;缺失了XopN的菌株在IRBB208、Asminori、日本晴水稻品种上引起病斑长度相对于野生型PX099A要短,且XopN突变体菌株和野生型菌株的致病力有显著差异;回补了 XopN后能够恢复水稻白叶枯菌株PX099A在水稻上的致病力;另外,XopN突变体菌株相对于野生型PX099A在烟草上引起的过敏反应差异不显著。