【摘 要】
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背景肿瘤是严重威胁人类健康的常见病、多发病,是医学研究的热点课题,现在大多数学者认为肿瘤的侵袭和转移是多因素、多步骤的发展过程,常常与某些基因的结构与功能的改变或
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背景肿瘤是严重威胁人类健康的常见病、多发病,是医学研究的热点课题,现在大多数学者认为肿瘤的侵袭和转移是多因素、多步骤的发展过程,常常与某些基因的结构与功能的改变或与某些基因表达调控异常有关,但目前所发现的许多与肿瘤相关的基因仍不能完全阐明肿瘤的发生发展和转移机制。涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma ACC)有嗜神经侵袭性和易发生远处转移的临床特点,研究ACC转移过程中基因表达的改变,有助于揭示肿瘤的发生发展及转移机制。限制性片段差异显示技术(restriction fragment differential display PCR, RFDD-PCR )是近年来在差异显示PCR(differential display PCR, DD-PCR)基础上发展起来的一种新技术,它充分利用了限制性片段长度多态性分析的可靠性和PCR的高效性,对基因组DNA酶切片段进行选择性扩增。它可从一对细胞群体或一对基因型各自产生的所有mRNA中有效地鉴定并分离出差异表达的基因,该技术解决了DD-PCR假阳性率高、重复性差及需要大量筛选引物等不足。已有学者利用该技术构建了乳腺癌的基因表达谱,但运用RFDD-PCR技术研究ACC基因表达差异则未见相关报道。目的分析比较涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株ACC-2和ACC-M基因表达的差异,为进一步探索该肿瘤的转移调控机制,及基因诊断、治疗、预后判断提供分子生物学资料。方法运用RFDD-PCR技术构建ACC-2和ACC-M的基因表达谱,6%尿素变性聚丙烯酰胺电泳进行表达差异基因的分离和显示,ImageMaster2D 5.0软件分析计算两细胞株基因表达谱各基因条带的灰度值,比较两细胞株基因表达的差异,再利用http://www.qbio-gene.com/display和http:// www.ncbi.nlm.nih. gov的数据和资料,经过生物信息学分析,从两细胞株差异表达谱寻找表达有明显差异的基因/EST,并利用RT-PCR对差异表达的基因
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