研究背景艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起的一种传染率高且造成极大疾病负担的传染病。至今尚无确切、有效的药物可以治愈。自美国1981年诊断出第一例艾滋病患者以来：,艾滋病病毒感染率居高不下。2014年全球已报告3700万艾滋病毒携带者,120万人死于艾滋病。目前我国艾滋病病毒感染者和艾滋病病人约占总人口的0.06%,即约每1万人中可能有6人感染了HIV病毒。截至2015年10月底,全国报告存活的艾滋病病毒感染者和病人共计57.5万例,死亡17.7万人。为有效控制艾滋病流行传播,制订适合我国国情的HIV实验室检测策略,对艾滋病的疫情监测、诊断和治疗有重要意义。目前HIV的检测方法有抗体检测、抗原检测和病毒核酸检测。其中检测HIV抗体的方法有酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、快速试验(Rapid test, RT)、蛋白印迹试验(Western Blot, WB)、重组免疫印迹试验(Recombinant Immunoblot Assay, RIBA)、化学发光免疫试验(chemiluminescence immunoassay, CIA)或免疫荧光试验(immunofluorescence assay, IFA)、明胶颗粒凝集试验(gelatin-particle agglutination test, PA)等；HIV特异抗原检测方法为ELISA;检测HIV病毒核酸的方法为聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)、核酸序列扩增试验、分支DNA扩增试验等。由于不同检测方法的敏感性和特异性有差别,临床需要组合不同的试验方法,制定不同的检测策略,以最低的检测成本达到最优的检测效果：。研究目的1、评价三类不同原理的人类免疫缺陷病毒抗体诊断方法。2、针对不同的检测人群提出并验证HIV抗体的检测策略。研究方法本研究分两部分进行,第一部分为三种原理HIV抗体检测方法学评估,应用六种血清盘(即基础血清盘、干扰样本血清盘、线性稀释系列血清盘、精密度血清盘、美国病理学家协会(CAP)能力验证血清盘以及商业阳转血清盘)对三种类型(HIV抗体快速检测方法、HIV抗体酶联免疫检测方法、HIV抗体免疫印迹检测方法)的诊断方法的临床敏感性、临床特异性、分析灵敏度、分析特异性及精密度等指标进行评价。评估诊断方法的整体性能,为后期检测策略的提出提供数据支持。第二部分研究,基于第一部分的评估结果(三种原理HIV抗体检测方法学的敏感性和特异性等指标),同时,由于HIV抗体检测方法中快速检测和酶联免疫检测方法应用最广,所以基于该两种原理的方法提出检测策略。将快速检测和酶联免疫诊断方法进行顺序排列组合,验证单一试剂检测策略、双试剂检测策略、三种试剂检测策略。研究对象：1.方法学评估选取六种血清盘即基础血清盘、干扰样本血清盘、线性稀释系列血清盘、精密度血清盘、美国病理学家协会(CAP)能力验证血清盘以及商业阳转血清盘。其中基础血清盘由40份阳性样本和40份阴性样本组成；干扰样本血清盘由15份HBsAg抗体阳性样本、15份梅毒抗体阳性样本以及10份HCV抗体阳性样本组成；线性稀释系列血清盘由3组强阳性混合样本倍比稀释系列组成；精密度血清盘由参比室精密度质控品组成,共3支,分高中低三个HIV抗体滴度；商业阳转血清盘共10套,购自美国SeraCare公司。CAP能力验证血清盘共10支,其中6支HIV抗体阳性,4支HIV抗体阴性。2.策略评估选取HIV和HCV哨点监测样本,共991份。包括甘肃MSM人群184份、云南吸毒人群165份、安徽丙肝阳性人群178份、福建VCT人群398份、近期感染者10人样本(66份)。研究结果：第一部分人类免疫缺陷病毒抗体诊断方法学评价1.敏感性与特异性：A试剂(酶免法、国产单独抗体检测试剂1)、B试剂(酶免法、国产单独抗体检测试剂2)、C试剂(酶免法、国产抗原抗体联合检测)、D试剂(酶免法、进口抗原抗体联合检测)、E试剂(金标法、国产单独抗体检测)、F试剂(胶体硒法、进口单独抗体检测),六种试剂应用基础血清盘评估,敏感性均40/40,特异性介于39/40～40/40。2.精密度：A-D酶免法检测试剂板内精密度分别为,高抗体滴度质控品检测精密度cv%值介于6.27%～12.89%；中抗体滴度质控品检测精密度cv%值介于4.40%～11.29%；低抗体滴度质控品检测精密度cv%值介于4.740%～24.98%。3.分析灵敏度：各试剂检测出阳性结果相比核酸检测出阳性的延长天数平均值介于7～11.8天,D试剂(酶免法、进口抗原抗体联合检测)最短7天,WB试剂最长为11.8天数。4. RIBA与WB比较：应用RIBA和WB分别对商业阳转盘进行检测。WB检测结果有3份阳性,14份不确定,49份阴性；RIBA检测结果有11份阳性、10份不确定、45份阴性。对商业阳转盘进行检测,RIBA阳性样本检出数多于WB,检测结果进行配对X2检验,P<0.05,差异有统计学意义。Kappa值为0.70。5.分析特异性：A试剂(酶免法、国产单独抗体检测试剂1)、B试剂(酶免法、国产单独抗体检测试剂2)、C试剂(酶免法、国产抗原抗体联合检测)、D试剂(酶免法、进口抗原抗体联合检测)、E试剂(金标法、国产单独抗体检测)、F试剂(胶体硒法、进口单独抗体检测),六种试剂应用干扰样本血清盘评估,分析特异性均为40/40。第二部分人类免疫缺陷病毒感染诊断的检测策略评价1.单一试剂检测策略：分别应用RT1(快速检测、胶体硒法)、RT2(快速检测、胶体金法)、RT3(快速检测、胶体金法)、ELISA3(酶免法、单独抗体检测)、ELISA4(酶免法、抗原抗体联合检测)单次检测991份样本。(1)总人群检测结果敏感性介于96.55%-99.31%,特异性介于98.84%～99.87%,符合率介于98.59%～99.35%。ELISA4(酶免法、抗原抗体联合检测)敏感性最高为99.31%,RT3(快速检测、胶体金法)特异性最高为99.87%。(2)各人群(自愿咨询检测人群、吸毒人群、丙肝抗体阳性人群、男男人群)分别检测统计,敏感性介于80%(4/5)-100%,特异性介于97.69%-100%,符合率介于97.58%～100%。2.酶免法初筛、快速法确证的双试剂检测策略：分别应用ELISA4→RT1、ELISA4→RT2、ELISA4→RT3策略,对样本进行检测。(1)总人群检测,三种组合敏感性介于96.55%～97.24%。特异性均为99.87%100%,符合率均为99.46%。(2)各人群(自愿咨询检测人群、吸毒人群、丙肝抗体阳性人群、男男人群)分别检测统计,敏感性介于80%(4/5)-100%,特异性介于99.72%～100%。符合率介于98.18%～00%。3.快速法初筛、酶免法确证的双试剂检测策略：分别应用RT1→ELISA4、RT1→ELISA3组合策略,对样本进行检测。(1)总人群检测,RT1→ELISA4组合敏感性为97.24%、特异性为99.87%、符合率为99.46%。RT1→ELISA3组合敏感性为96.55%,特异性为100%,符合率99.46%。(2)各人群(自愿咨询检测人群、吸毒人群、丙肝抗体阳性人群、男男人群)分别检测统计,RT1→ELISA4组合敏感性介于94.87%～100%,特异性介于99.72%-100%,符合率介于98.79%～100%；RT1→ELISA3组合敏感性介于94.87%～100%,特异性均为100%,符合率介于98.18%～100%。4.快速法初筛、快速法确证的双试剂检测策略：分别应用RT1→RT2、RT1→RT3策略,对样本进行检测。(1)总人群检测,两种组合敏感性、特异性、符合率相同,分别为96.55%、100%、99.46%。(2)各人群(自愿咨询检测人群、吸毒人群、丙肝抗体阳性人群、男男人群)分别检测统计,敏感性介于80%(4/5)-100%,特异性均为100%,符合率介于98.18%～100%。5.酶免法初筛、酶免法确证的双试剂检测策略：分别应用ELISA4→ELISA3组合策略进行检测,总人群敏感性为96.55%,特异性为99.74%,符合率为99.24%。各人群分别统计敏感性介于94.87%～100%,特异性介于99.42%～100%,符合率介于98.18%-100%。6.三试剂检测策略：RT1→RT2→RT3组合进行检测,总人群灵敏度为95.86%,特异性为100%,,符合率为99.35%；自愿咨询检测人群敏感性为94.87%,特异性为100%,符合率为99.50%；吸毒人群检测敏感性为96.30%,特异性为100%,符合率为98.18；丙肝抗体阳性人群检测敏感性为80%(4/5),特异性为100%,符合率为99.44%；男男人群检测,该组合的敏感性、特异性、符合率均为100%。7.近期感染样本检测策略：近期感染样本检测结果,RT1、RT2、RT3、ELISA3、ELISA4分别检出13、12、11份、12份、22份阳性结果。ELISA4检出22份阳性样本,分析灵敏度最高。ELISA4→WB组合确证3份阳性、14份不确定；ELISA4→PCR组合确证22份阳性。研究结论：1.参与评价的ELISA诊断方法与快速诊断方法均有较高的敏感性和特异性,抗原抗体检测方法敏感性相对较高,更适合作为抗体筛查方法。2.4种ELISA检测方法板内精密度差别较大,检测低抗体滴度质控品时,精密度值跨度最大,可能会影响检测结果的准确性。3.作为HIV抗体确证方法,RIBA与WB相比分析灵敏度较高,不确定率低,减少了由于不确定带来的随访率,确证急性感染的检验效能较高。4.应用单试剂检测策略对人群样本进行检测,均存在假阴性和假阳性的情况。5.应用双试剂检测策略对各人群检测,检测结果的特异性增加,约为100%,但是在自愿咨询检测样本中存在假阳性的情况。6.三种快速法组合检测策略与两种检测方法组合检测策略比较,特异性方面没有差异,敏感性降低。7.近期感染样本应用ELISA抗原抗体检测试剂与核酸组合检测,检测效率较高,可以有效缩短窗口期。