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目的：肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）是神经系统慢性进行性变性疾病，选择性累及脑和脊髓中的运动神经元。临床表现为逐渐加重的肌无力、肌萎缩及锥体束征，最终累及呼吸肌，多于发病后3-5年内死亡。其具体发病机制尚不明确，一般认为与谷氨酸毒性，氧化应激，细胞骨架异常，轴浆运输障碍等多种病因相关。目前，除利鲁唑可延缓其疾病进展外，缺乏有效治疗。氧化应激被认为是多种神经退行性疾病的最后通路，其作为ALS发病机制之一也愈发受到关注。中枢神经系统对活性氧敏感的原因：1)神经元内天然抗氧化剂谷胱甘肽含量低；2)细胞膜含有较高成分的不饱和脂肪酸；3)脑的高代谢使得需氧量相对增多。铁是人体必须微量元素，具有多种生理功能，但是过多的铁离子聚集会通过Fenton反应生产羟自由基，导致氧化应激，造成DNA，脂质，蛋白质的损伤。铁稳态的平衡有赖于多种铁代谢相关蛋白，而铁蛋白（Ferritin）作为铁代谢相关蛋白之一则发挥着重要的调节作用，其可以结合游离的二价铁离子，阻止Fenton反应及后续的氧化应激的发生，从而起到脑保护的作用。研究证实肌萎缩侧索硬化患者体内铁代谢异常，血清铁蛋白升高，而且，动物模型中也证实铁离子螯合剂可以阻止SODlG93A转基因鼠运动神经元变性，延缓疾病进展并延长寿命。丁苯酞（dl-3-n-Butylphthalide）是我国心脑血管领域中第一个拥有自主知识产权的新药，提取于芹菜种子中，相对分子质量为190.24，具有多种神经保护功能，可直接通过血－脑屏障，重构缺血区微循环，保护线粒体免受损伤，改善能量代谢等。研究证实其可以明显改善血管性痴呆患者的症状，提高其血清内SOD的活性并降低MDA的含量，从而减少氧化应激。在以往的研究中，我们发现丁苯酞可以延长SODlG93A转基因模型鼠的寿命［１］，本实验通过观察丁苯酞对家族性肌萎缩侧索硬化转基因模型鼠SODlG93A的发病时间和生存期及其脊髓Ferritin表达的影响，旨在探讨丁苯酞对SODlG93A转基因鼠的作用及其神经保护机制。方法：１动物分组及药物干预经PCR技术鉴定，选取SODlG93A阳性小鼠72只，随机分为丁苯酞组（发病早期及终末期），安慰剂组（发病早期及终末期），空白对照组（发病早期及终末期），每组12只，雌雄各半。于42天起应用180mg/kg剂量的丁苯酞干预治疗组，安慰剂组则给予10mg/kg的玉米油，采用灌胃方法，一天一次，空白对照组自由摄取自来水。分别于发病早期（110天左右）及终末期取材。２发病时间及生存期判定若SODlG93A转基因鼠出现后肢瘫痪或走路不稳的迹象则判定为发病［２］，小鼠从出生到发病的时间记录为发病时间；将其仰卧位放置于平板上不能翻身，或体重丢失20%，视为终末期［２］，小鼠从出生到死亡的时间记录为生存期。３免疫组化采用10%水合氯醛麻醉小鼠后，以4%多聚甲醛经心脏灌注固定2030分钟后，取小鼠腰段脊髓固定于多聚甲醛内48小时，震荡切片25μm厚度，应用免疫组织化学方法观察腰段脊髓Ferritin的表达情况，其中符合位于脊髓中央管以前、胞核及核仁着色清晰，直径大于25μm的运动神经元定为α运动神经元。４免疫印迹采用10%水合氯醛麻醉小鼠后，即刻新鲜取材，取小鼠腰段脊髓，液氮冷冻，-80℃保存，采用免疫印迹的方法观察腰段脊髓总蛋白中Ferritin的定量表达。５统计学方法所有数据应用SPSS13.0软件进行统计学处理，生存时间采用Kapane-Meier（K-M）生存曲线进行统计分析，计量资料应用X±S表示，生化指标应用ANOVA进行方差分析。P<0.05有统计学意义。结果：１发病时间与生存期发病时间：丁苯酞组为118.0±2.5，安慰剂组为109.5±2.2，空白对照组为107.1±1.0；丁苯酞组与安慰剂组相比较，P=0.011，<0.05，具有统计学差异；丁苯酞组和空白对照组相比，P=0.000，<0.05，具有统计学差异；而安慰剂组和空白对照组相比，P=0.209，>0.05，无明显统计学差异。生存时间：丁苯酞组为138.6±2.3，安慰剂组为128.1±2.8，空白对照组为127.4±2.3；丁苯酞组与安慰剂组相比较，P=0.034，<0.05，具有统计学差异；丁苯酞组和空白对照组相比，P=0.000，<0.05，具有统计学差异；而安慰剂组和空白对照组相比，P=0.555，>0.05，无明显统计学差异。２免疫组化发病初期，Ferritin蛋白阳性的神经元数目，丁苯酞组为23.83±1.75；安慰剂组为17.67±3.39；空白对照组为13.50±1.73；各组间相比较，P=0.000，<0.05，具有统计学差异；安慰剂组和空白对照组中的运动神经内胞浆和胞膜周围均匀着色，而丁苯酞组中的运动神经元内仅胞膜周围着色，胞核和胞浆着色不明显。终末期，Ferritin蛋白阳性的神经元数目，丁苯酞组为8.25±1.22；安慰剂组为5.33±0.78；空白对照组为4.67±1.16；各组间相比较，P=0.000，<0.05，具有统计学差异；安慰剂组及空白对照组中的运动神经元数目较丁苯酞组相比减少，三者胞核及胞浆均有着色，并且可见胶质细胞增生。３免疫印迹发病初期，Ferritin在腰髓表达量的相对值，丁苯酞组为0.81±0.23；安慰剂组为1.57±0.43；阴性对照组为0.35±0.13；三者相比较，P=0.006，<0.05，具有统计学差异；丁苯酞组与安慰剂组相比较，P=0.039，<0.05，具有统计学差异；丁苯酞组与阴性对照组相比较，P=0.042，<0.05，具有统计学差异；安慰剂组与阴性对照组相比较，P=0.006，<0.05，具有统计学差异。终末期，Ferritin在腰髓表达量的相对值，丁苯酞组为1.45±0.45；安慰剂组为1.73±0.36；阴性对照组为0.78±0.36；三者相比较，P=0.023，<0.05，具有统计学差异；丁苯酞组与安慰剂组相比较，P=0.449，>0.05，无统计学差异；丁苯酞组与阴性对照组相比较，P=0.047，<0.05，具有统计学差异；安慰剂组与阴性对照组相比较，P=0.010，<0.05，具有统计学差异。结论：丁苯酞可以减少脊髓Ferritin的表达，延迟ALS小鼠的发病时间并延长其生存期。