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目的:构建靶向YB-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体并鉴定其抑制效率。观察靶向干扰YB-1对乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响。方法:设计并化学合成3对靶向YB-1基因的短发夹结构siRNA链(shRNA),退火成双链DNA后与酶切的质粒pGenesil-1连接,然后酶切和测序鉴定。脂质体法转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光定量PCR(FQ-PCR)和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平鉴定YB-1基因的表达情况,筛选对YB-1基因表达抑制效果最好的重组载体。通过脂质体介导的方法,将筛选出的YB-1 shRNA重组载体转入MDA-MB-231细胞。运用RT-PCR和Western blot法检测MDA-MB-231细胞中YB-1、MMP-2、MMP-9在mRNA和蛋白的表达水平;分别用MTT法及流式细胞仪检测转染后细胞增殖、凋亡的变化;以Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果:携siRNA的重组质粒pGSi1、pGSi2和pGSi3经测序证明构建成功。筛选出对MDA-MB-231细胞YB-1基因表达抑制效果最好的重组载体为pGSi2。转染pGSi2的细胞较转染阴性对照HK的细胞,YB-1的表达明显降低,沉默YB-1表达可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,细胞侵袭能力以及MMP-2和MMP-9的表达也较HK组细胞明显下降(P均<0.05)。结论:成功构建了靶向YB-1基因的siRNA表达质粒,并筛选出一种对YB-1基因有显著抑制作用的siRNA。YB-1 shRNA可以沉默MDA-MB-231细胞中YB-1的表达,抑制细胞增殖,诱导凋亡和抑制细胞侵袭能力以及MMP– 2、MMP-9的表达。