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本学位论文有两部分研究内容,第一部分是ESI源中带电液滴蒸发速度对电解质效应影响的研究；第二部分是硫酸羟氯喹分散片和片剂人体生物等效性研究。
中药多成分的药物代谢与药物动力学研究可为研究其药理作用提供物质基础方面的有力佐证。建立生物样品中多成分一同检测的定量分析方法是开展中药多成分药物代谢与药物动力学研究的重要前提之一。由于中药化学组分种类繁多、结构复杂且口服后体内暴露通常较低而静脉注射后有较高的暴露,采用LC-MS/MS技术建立分析方法时要着重关注提高化合物的质谱响应信号、克服基质效应的干扰、提高检测上限等方面。
“电解质效应”(“LC-electrolyteeffects”)是指通过在流动相中加入合适浓度的挥发性电解质来增加化合物的ESI离子化效率从而提高检测的灵敏度,克服样品分析中基质效应的干扰并拓宽化合物标准曲线的动态线性范围。在进一步的扩大应用中,我们考察了在基于不同离子源设计的LC-MS/MS系统(TSQquantum和API4000QTrap)上,流动相中的电解质对被测化合物离子化效率、基质效应、检测上限的影响。
在TSQquantumLC-MS/MS系统上,流动相中添加合适的低浓度的HCOOH可以达到化合物的最高响应,而在API4000QTrapLC-MS/MS系统的常用条件下,流动相中无须添加电解质,化合物就能有很好的离子化效率,随着流动相中添加HCOOH的浓度的提高,反而会抑制化合物的响应。在两种LC-MS/MS系统中,随着流动相中HCOOH浓度的增加,对基质效应的克服都有一定的作用。在TSQquantumLC-MS/MS系统上,流动相中的低浓度的HCOOH可以增加化合物的检测上限,而在API4000QTrapLC-MS/MS系统的常用条件下,流动相中添加的电解质对检测上限的提高有限。但是在API4000OTrapLC-MS/MS中,将液滴蒸发速度下降后,流动相中HCOOH浓度对离子化效率、基质效应、检测上限的影响和TSQquantumLC-MS/MS中呈现出一致性,我们推测有可能高温高流速引起的带电液滴快速蒸发会影响电解质效应的作用。
本研究结果显示,在不同类型离子源的LC-MS/MS系统上进行分析方法转移(Methodtransfer)时,应合理选择流动相中的电解质的浓度。同时,本研究结果对LC-MS/MS在生物样品中中药多成分分析也有重要指导意义。
在第二部分内容中,我们进行了硫酸羟氯喹分散片和片剂的人体生物等效性研究。48个健康受试者随机分成两组分别口服测试制剂(硫酸羟氯喹分散片)和测试制剂(硫酸羟氯喹片)。剂量为单次口服200mg硫酸羟氯喹。我们利用LC-MS/MS建立了灵敏、特异、快速测定人全血样品中HCQ浓度的分析方法并进行了方法学确证,并将该法用于测定临床受试者口服硫酸羟氯喹片和硫酸羟氯喹分散片后HCQ的血药浓度。AUC0-t的几何平均数为10443ng·h/mL,和10883ng·h/mL,Cmax的几何平均数为197ng/mL和202ng/mL；AUC0-t和Cmax的点估计(90％置信区间)分别为99.6％(98.2％～100.9％)和97.8％(96.5％～102.7％),满足SFDA对生物等效性评价的要求(80～125％)；体内达峰时间(tmax)的几何平均数均约为3.6h左右,应用Wilcoxon非参检验,U=0.094,P=0.925。结果证明两种制剂生物等效,可以替换使用。