【摘 要】
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本实验以紫苏外植体作为研究材料,以建立并且优化高产迷迭香酸的紫苏细胞悬浮体系为目的,分别从紫苏外植体的消毒,愈伤组织的诱导,细胞悬浮体系的建立以及悬浮培养条件的优化
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本实验以紫苏外植体作为研究材料,以建立并且优化高产迷迭香酸的紫苏细胞悬浮体系为目的,分别从紫苏外植体的消毒,愈伤组织的诱导,细胞悬浮体系的建立以及悬浮培养条件的优化等方面进行了研究。其研究结果如下:(1)分别以紫苏叶片、茎段、子叶为外植体,采用0.1%升汞溶液和2%次氯酸钠溶液以不同处理时间对外植体进行消毒,探讨不同处理条件对外植体污染率和诱导率的影响。结果表明,综合考虑紫苏叶片,茎段,子叶的污染率与诱导率,选取紫苏的叶片进行愈伤组织的诱导,先用75%乙醇处理30S,再用0.1%升汞溶液处理7min,此时污染率为5%,诱导率为80.7%。(2)分别向B5、MS两种基本培养基中添加不同浓度的激素组合,通过正交实验,研究不同培养基以及激素浓度对紫苏叶片愈伤组织诱导率的影响。综合考虑愈伤组织的诱导率以及愈伤组织的生长状况,可以得出,紫苏的叶片诱导愈伤组织的最优培养基为B5培养基,添加激素为2,4-D1.0mg/L, KT0.4mg/L,6-BA1.0mg/L, NAA1.5mg/L。(3)以悬浮细胞中迷迭香酸含量为最终考察目标,通过单因素实验以及正交实验表明,紫苏悬浮细胞较好培养体系为B5液体培养基,pH6.0,蔗糖浓度4.0%,肌醇浓度150mg/L,6-BA2.0mg/L,2,4-D2.0mg/L, KT0.4mg/L, NAA1.5mg/L。(4)通过高效液相色谱测定紫苏外植体,愈伤组织以及悬浮细胞中迷迭香酸的含量,可以得出叶片中含量为0.25%,茎中含量为0.72%,愈伤组织中含量为3.85%,悬浮细胞中含量(干重)为15.8mg/g~26.1mg/g。与外植体中的含量相比,有了显著的提高。
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