论文部分内容阅读
目的探讨羟基红花黄色素A对高糖培养情况下微血管内皮细胞(恒河猴脉络膜血管内皮细胞)增殖及血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达的影响。方法取体外培养的RF/6A细胞,分为NG+H0、NG+H18、NG+H37、NG+H73组(各组中均含有5.5mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度分别为0、18、37、73mg/L)及HG+H0、HG+H18、HG+H37、HG+H73组(各组中均含有22mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度分别为0、18、37、73mg/L)。培养24h、48h、72h,分别使用噻唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖的活性,并根据吸光度值计算对增殖抑制的抑制率。应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况。采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)来检测培养各组RF/6A细胞中VEGF mRNA的相对表达量,观察羟基红花黄色素A及高糖对RF/6A细胞中VEGF mRNA的影响。实验结果以均数±标准差(x±s)表示,各组吸光度A值、VEGF mRNA相对含量比较数据处理采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),并采用LSD法进行两两比较,P <0.05具有统计学差异。结果1.光学显微镜观察HSYA对RF/6A细胞生长的影响:HG+H0组与NG+H0组比较:RF/6A细胞的生长明显加快;HG+H18、HG+H37、HG+H73组与HG+H0组比较,RF/6A细胞的生长明显受抑制。2.通过MTT检测细胞吸光度值观察HSYA对内皮细胞增殖的影响,结果表明:⑴培养48h、72h时,HG+H0组与NG+H0组相比吸光度值显著增高(P<0.01)。⑵HSYA作用24h,各高糖培养组吸光度值相比无统计学差异(p>0.05)。HSYA作用48小时,HG+H37、HG+H73组细胞吸光度值均明显低于HG+H0组(P<0.01),随着HSYA浓度的增加,各组吸光度值降低。作用72h,HG+H18、HG+H37、HG+H73组细胞吸光度值均明显低于HG+H0组(p<0.01),随着HSYA浓度的增加,各组吸光度值降低,HG+H73组抑制作用最明显,其细胞吸光度值明显低于HG+H18、HG+H37组(分别为p<0.01和p<0.05)。⑶不同浓度的HSYA对正常糖浓度(5.5mmol/L)培养的RF/6A细胞的增殖无明显抑制作用,各组细胞吸光度值比较均无统计学差异(p>0.05)。3.RT-PCR实验结果表明:⑴HG+H0组VEGF mRNA的表达明显上调,与NG+H0组相比,其表达量在24h、48h、72h均明显增高(p<0.01)。⑵HSYA作用24h,各高糖培养组VEGF mRNA表达量无统计学差异(p>0.05)。作用48h,HG+H37、HG+H73对RF/6A细胞VEGF mRNA表达的抑制作用显著,与HG+H0组相比具有统计学意义(P<0.01);而作用72h,HG+H18、HG+H37、HG+H73对高糖诱导的VEGF mRNA的表达均有抑制作用(p<0.01),使高糖诱导的VEGF mRNA的表达下降到NG+H0组的表达水平(p>0.05)。⑶不同浓度的HSYA对正常糖浓度(5.5mmol/L)培养的RF/6A细胞的VEGF mRNA的表达无明显影响(p>0.05)。结论1.HSYA能够抑制高糖培养诱导的视网膜微血管内皮细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性;HSYA能够下调高糖培养诱导的视网膜微血管内皮细胞VEGF mRNA的表达;2. HSYA抑制视网膜微血管内皮细胞增殖的作用的机制可能是通过下调VEGF的表达来实现的;