论文部分内容阅读
背景胃癌是全球第五大恶性肿瘤,也是癌症相关死亡的主要原因。在中国,胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率仅次于肺癌、肝癌。转移和侵袭仍然是死亡率高的主要原因。因此,对胃癌迁移和侵袭的分子机制研究具有重要意义。MicroRNAs是一类微小非编码RNA,在肿瘤的发生发展过程中起重要调控作用。研究表明,异常表达的miRNAs可以作为抑癌或促癌基因,通过与其他基因结合,参与肿瘤的增殖、迁移和侵袭的调控。miRNAlet-7是最早被发现的人类miRNA之一,其家族成员的序列和功能在物种间具有高度保守性,迄今为止,在人类中已经发现了 9个成熟let-7 miRNAs。研究表明,let-7参与了多种肿瘤的发生发展。miR-let-7c-5p作为let-7家族的成员之一,其在胃癌中的临床意义以及对胃癌发生发展的影响机制尚不清楚。MTDH(Metadherin,异粘蛋白)也被命名为 AEG-1(Astrocyte Elevated Gene-1,星形胶质细胞升高基因-1),位于染色体8q22,2002年首次发现于感染HIV-1病毒的原代人胚胎星形胶质细胞。MTDH在多种肿瘤中高表达并作为促癌基因调控肿瘤的进展、血管新生、转移、侵袭和化疗耐药。MTDH可以作为多种癌症的独立预后指标,对判断肿瘤的临床预后具有重要意义。EMT(Epithelial-Mesenchymal Transition,上皮间质转化)这一概念是由Greenburg和Hay在1982首次提出。EMT是一个通过细胞从上皮表型转化到间叶表型以促进肿瘤细胞的侵袭和迁移的复杂过程,在肿瘤的转移和迁徙中起重要作用。上皮生物标志物包括E-cadherin(E-钙粘蛋白)等,间叶生物标志物包括N-cadherin(N-钙粘蛋白)和vimentin(波形蛋白)等。目的检测miR-let-7c-5p在胃癌中的表达,分析其表达与临床病理资料的相关性,观察miR-let-7c-5p对胃癌细胞功能的影响,研究MTDH和EMT在miR-let-7c-5p影响胃癌发生发展过程中的分子机制,为胃癌的治疗提供新靶点。方法1.实时定量PCR测定胃癌组织和细胞中miR-let-7c-5p表达量,并分析其与临床病理特征间的关系。2.在SGC7901和MGC803细胞中利用慢病毒转染过表达和敲低miR-let-7c-5p,划痕实验、Transwell侵袭及迁徙实验观察各组胃癌细胞侵袭迁移功能变化。3.Western blot法检测各实验组胃癌细胞中EMT相关标志蛋白表达。4.双荧光素酶报告基因实验验证miR-let-7c-5p与MTDH-3’UTR是否具有结合位点。5.MTDH回复实验,Western blot法检测胃癌细胞中EMT相关标志蛋白表达回复情况。6.构建裸鼠转移模型,观察miR-let-7c-5p在体内对胃癌功能的影响。结果1.miR-let-7c-5p在胃癌组织和细胞系中低表达,并与胃癌进展有关。2.miR-let-7c-5p抑制胃癌细胞迁徙和侵袭。3.miR-let-7c-5p调控胃癌细胞中EMT表型。4.MTDH 是 miR-let-7c-5p 的靶基因。5.MTDH在胃癌中参与miR-let-7c-5p调控EMT。6.miR-let-7c-5p在动物体内抑制胃癌转移。结论miR-let-7c-5p通过靶向抑制MTDH从而调控EMT最终抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。