[目的]宫颈癌是世界范围内严重威胁广大妇女健康的恶性肿瘤之一,目前研究认为其与人乳头瘤病毒HPV的感染有关,但是,HPV的感染并不能解释所有宫颈癌的发生。越来越多的证据表明在宫颈癌的发生发展过程中许多基因的表达和活性发生了改变,包括微小RNA(microRNA,miRNA)分子。因此,鉴定新的特异性的分子标记物不但有助于阐明宫颈癌发生发展的分子机制,而且可以促进开发新的有效的诊断和治疗策略。miRNA是一类约22nt大小的非编码RNA分子,通过与其靶基因的相互作用而对基因表达发挥负性调节的作用。研究已经发现miRNA分子可以发挥癌基因或抑癌基因的作用,参与癌症的发生发展过程。本课题着重研究miR-214在宫颈癌HeLa细胞中的具体功能,鉴定其下游直接的靶基因,并通过进一步分析靶基因的功能及其参与的相关信号通路,结合miR-214表达发生改变的调控性研究,全面探讨miR-214发挥作用的具体分子机制及其可能的调控途径。[方法]首先利用实时荧光定量PCR技术检测miR-214在21对宫颈癌及其邻近正常组织中的表达水平;随后在宫颈癌HeLa细胞中过表达miR-214,利用MTT实验、生长曲线、克隆形成、细胞划痕、Transwell迁移和侵袭实验、细胞生存实验、药敏实验及TUNEL实验检测miR-214对HeLa细胞恶性表型的影响;继而通过生物信息学方法结合miRNA表达谱分析,筛选miR-214作用的可能靶基因,并利用荧光报告载体实验结合实时定量PCR和Western印迹技术验证miR-214对其靶基因的直接调控作用及其可能的调控方式;然后利用RNA干扰技术,结合上述表型实验分析干扰靶基因表达后细胞表型的变化,研究靶基因的具体功能;最后应用Western印迹检测miR-214表达发生改变后一些相关分子的变化,并利用去甲基化酶及去乙酰化酶抑制剂处理等方法结合生物信息学技术分析miR-214上游可能受到的表观调控。[结果]miR-214在宫颈癌组织及宫颈癌HeLa细胞中表达明显下调;过表达miR-214明显降低HeLa细胞的活性、生长和增殖,迁移和侵袭能力以及细胞的生存能力,增加细胞对化疗药物顺铂的敏感性,而且可以促进细胞的凋亡。进一步筛选并证实了miR-214发挥作用的两个直接靶基因——Plexin-B1和BcI212。深入研究靶基因的功能后发现,RNA干扰Plexin-B1表达后细胞生长与增殖、迁移与侵袭能力均减弱;而RNA干扰Bcl212后则使得HeLa细胞的生存能力降低,对顺铂的敏感性增加。Western印迹还发现了增加miR-214的表达能够下调凋亡关键蛋白Bax、P53及NF-κB1。此外,用甲基转移酶抑制剂和去乙酰化酶抑制剂处理HeLa细胞后,发现miR-214的表达增高而其四个靶基因的表达却降低。[结论]首先发现了miR-214在宫颈癌组织中呈低水平表达,它通过调节其直接靶基因——Plexin-B1和Bcl212的表达而发挥抑癌基因的作用,其中,Plexin-B1主要负责细胞生长与增殖、迁移与侵袭能力的改变,而Bcl212参与miR-214引起的细胞生存能力及对顺铂敏感性的变化。其次,构建了一个miR-214影响细胞凋亡的分子网络,其中涉及Bcl212、Bax、MEK3、JNK1、P53及NF-κB1等关键基因。此外,还发现miR-214的表达受到了启动子甲基化及组蛋白去乙酰化的调控。总之,这些结果比较系统地阐明了miR-214在宫颈癌中的功能及其作用的分子机制,必将为开发宫颈癌新的诊断和治疗手段提供新的选择。