【摘 要】
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目的:探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）通过上调神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,n NOS）促进心肌细胞舒张的作用及机制。方法:使用胶原酶Ⅱ在Langendorff灌流系统分离左心室心肌细胞。使用Ion Optix系统测量电刺激引起的心肌细胞肌小节长度变化（收缩及舒张程度）。Fura-2荧光比用于检测[Ca2+]i。由Fur
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目的:探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）通过上调神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,n NOS）促进心肌细胞舒张的作用及机制。方法:使用胶原酶Ⅱ在Langendorff灌流系统分离左心室心肌细胞。使用Ion Optix系统测量电刺激引起的心肌细胞肌小节长度变化（收缩及舒张程度）。Fura-2荧光比用于检测[Ca2+]i。由Fura-2比率与肌节长度的相平面图来评估肌丝钙敏感性。对大鼠心肌细胞溶解物进行免疫印迹检测。测量心肌细胞中的亚硝酸盐含量来检测一氧化氮。结果:1.Ang Ⅱ处理心肌细胞30min、1h、2h、3h和6h,并测定收缩反应。在30min时,舒张略有延迟（P<0.001）。TR50在1h或2h后恢复到基础水平（P=0.6）。在与Ang Ⅱ处理3h后,心肌细胞舒张明显加快（P<0.001）,并保持在这一水平达6h（P=0.001）;2.在较低剂量的Ang Ⅱ（3h）下观察到类似的快速舒张（10 n M:P=0.03,100n M:P<0.001）。Ang Ⅱ在所有测试浓度下（10 n M、100 n M和1μM）均显著促进了舒张;3.在心肌细胞预处理（3h）氯沙坦抑制了Ang Ⅱ诱导的快速舒张（P=0.53）,Ang Ⅱ 2型受体（angiotensin Ⅱ receptor type 2,AT2R）拮抗剂PD 123319阻断了Ang Ⅱ对心肌细胞舒张的作用（P=0.59）,Mas R拮抗剂A779没有阻断Ang Ⅱ对心肌舒张的作用（P<0.001）;4.n NOS蛋白的表达在Ang Ⅱ处理的心肌细胞中显著增加（3 h,P=0.01）,NO的产量（亚硝酸盐含量）也较高（3 h,P<0.0001）。用选择性n NOS抑制剂SMTC预处理心肌细胞抑制了Ang Ⅱ对一氧化氮的增强作用（P=0.4）;5.SMTC完全阻止了Ang Ⅱ促进心肌细胞舒张。L-NAME也能阻止Ang Ⅱ促进心肌细胞舒张;6.PKA抑制剂没有阻断Ang Ⅱ促进心肌细胞舒张。钙调蛋白激酶Ⅱ（Ca MKⅡ）抑制剂KN-93没有阻断Ang Ⅱ诱导的快速的心肌细胞舒张（P<0.001）;7.可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂（ODQ）或PKG抑制剂（KT 5823）不影响基础肌细胞舒张,但抑制Ang Ⅱ诱导的快速舒张（P=0.9）。Ang Ⅱ（3 h）显著增加PLN-Ser16的磷酸化而不影响总PLN（P=0.003）。SMTC预处理阻断了Ang Ⅱ诱导的PLN-Ser16磷酸化（P=0.7）。KT 5823也抑制了PLN-Ser16的磷酸化（P=0.9）。结论:Ang Ⅱ上调n NOS的蛋白表达及增加其活性,上调的n NOS通过c GMP/PKG依赖的PLN-Ser16磷酸化促进心肌细胞舒张。
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