小鼠卵巢及早期胚胎发育过程中SNAIL和SLUG的表达与功能研究

来源 :山东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaojingda08
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哺乳动物的妊娠取决于卵泡的发育,卵母细胞的成熟、排卵,受精过程,胚胎的发育及着床等,这些过程是由许多基因和信号分子调控的。SNAIL和SLUG属于SNAIL锌指转录因子超家族的成员,参与调控细胞分裂,细胞存活,中胚层的形成及上皮-间质细胞的转换(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)等过程。目前对于SNAIL和SLUG的研究主要集中在迁移的组织中,例如原条,中胚层,肺,肾,肢芽等。但是对于SNAIL和SLUG在卵巢及早期胚胎中的表达及功能还不为人知。在本实验中,我们以新生小鼠,促性腺激素诱导的未成熟的小鼠及早期胚胎为研究对象,利用酶连免疫组织化学、激光共聚焦显微技术及Western-blot等实验方法,研究SNAIL和SLUG在卵泡发育,排卵,黄体化及早期胚胎发育过程中的表达情况,进而推断它们在这些过程中所发挥的作用。另外,本文还对SNAIL和SLUG在GVBD期的卵母细胞中的定位做了研究。结果显示:SNAIL在出生后1天(postnatal day1,PD1)及卵泡发育的早期阶段(出生后1-5天)仅在卵巢上皮细胞有表达,直到出生后6天的间质细胞及膜细胞中开始有表达,之后在出生后8天的卵母细胞中开始表达。从出生后8天开始一直在上皮细胞,膜细胞,间质细胞及卵母细胞中表达,但是在颗粒细胞中一直没有表达。与SNAIL表达不同,SLUG除在出生后1天的小鼠卵巢的上皮细胞有表达外,还在卵母细胞中有表达,随着卵泡的发育,在出生后6天的膜细胞,间质细胞中表达,同样在颗粒细胞中始终没有表达。在激素诱导的未成熟的小鼠卵巢发育过程中,SNAIL不仅在腔前卵泡,有腔卵泡及成熟卵泡的卵母细胞,间质细胞及膜细胞中持续表达,还在排卵后生成的黄体细胞中有强烈的表达,但是随着黄体的退化,表达水平下降。SLUG在激素诱导的未成熟的小鼠卵泡发育过程中的表达情况与SNAIL相同,同样,在排卵后形成的黄体中也有表达,并且发现是从新生黄体的外围逐渐向内部表达,伴随着黄体的退化,表达量下降。Western-blot结果显示,在激素处理的未成熟的小鼠在卵泡生长,成熟,排卵及黄体生成的过程中,PMSG0h,24h,48h以及hCG4h,10h,11h,12h,24h这8个时间点,SNAIL和SLUG的表达量变化不大,但是在hCG48h的黄体中表达量减少,这与我们免疫组化中的结果一致。我们发现在GVBD期的卵母细胞中,SNAIL和SLUG在除核仁以外的整个卵母细胞中都有表达。在小鼠早期胚胎发育过程中SNAIL定位在1-8胚胎的细胞核和细胞质中,但是仍然在核仁中没有表达,在桑椹胚期,SNAIL在细胞质中表达,而在囊胚期SNAIL在细胞核中表达,并且在囊胚后期的滋养外胚层及内细胞团的细胞核中一直有表达。在小鼠早期胚胎发育过程中,SLUG定位于1-8细胞胚胎的细胞核及细胞质中,核仁中没有表达,而在桑葚胚及整个囊胚期中SLUG仅定位于细胞质中。综上所述,我们认为SNAIL和SLUG在卵巢发育及早期胚胎发育过程中发挥着重要的作用,但是由于它们的表达情况不完全相同,因此发挥着不同的生理功能。
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