布鲁氏菌病是一种严重威胁人类健康的细菌性人兽共患病。其主要有流产布鲁氏菌(B.abortus)、马耳他布鲁氏菌(B.melitensis)、猪布鲁氏菌(B.suis)和绵羊附睾布鲁氏菌(B.ovis)等。布鲁氏菌能够感染各种驯养及野生动物,并对生殖系统的各种器官具有很严重的危害,可导致母畜流产和病畜生殖能力减退,使畜主受到严重的经济损失。目的1.通过基因组序列比对分析软件找到能够辨别布鲁氏菌S2疫苗株和其他疫苗株及野毒株的鉴别标识序列。2.通过标识序列进行布鲁氏菌S2疫苗株的检测方法(PCR和实时荧光定量PCR)。以应用于布鲁氏菌病的防治工作和布鲁氏菌S2疫苗株的鉴别诊断。方法1.使用基因组比对软件将S2疫苗株与野毒株1330全基因组序列比对分析,再与其他常用布鲁氏菌疫苗株进行比对分析,得到布鲁氏菌S2疫苗株的核酸标识序列。2.根据发现的布鲁氏菌S2疫苗株标识序列设计合成引物和探针,用布鲁氏菌S2疫苗株和其他疫苗株及野毒株总核酸为模板,进行PCR和多重q PCR检测方法的条件优化,特异性及灵敏度试验,建立布鲁氏菌S2疫苗株的分子生物学诊断方法。3.提取人工样品核酸验证所建立的检测方法,并与布鲁氏菌Bruce-Ladder检测方法进行对比分析。结果1.通过基因组对比分析软件对比分析,查找到布鲁氏菌S2疫苗株与野毒株1330之间存在的差异序列,再与常用布鲁氏菌疫苗株进行比对分析,发现了可以鉴别布鲁氏菌S2疫苗株的标识序列,并根据此处设计合成布鲁氏菌S2疫苗株PCR引物、荧光定量PCR引物探针和非S2疫苗株的荧光定量PCR探针。2.通过条件优化,确定了S2疫苗株诊断方法的反应体系与反应条件,并且检测方法特异性良好,S2疫苗株PCR检测灵敏度为10~3Copies/μL,S2疫苗株荧光定量PCR灵敏度为5 Copies/μL,非S2疫苗株荧光定量PCR灵敏度为70 Copies/μL,S2疫苗株双重荧光定量PCR灵敏度为200Copies/μL。结论成功找到了可以区分布鲁氏菌S2疫苗株和其他疫苗株及野毒株的标识序列,并根据此序列建立了布鲁氏菌S2疫苗株的检测方法,包括常规PCR检测,荧光定量PCR检测和多重荧光定量PCR检测,能够有效检测是否为布鲁氏菌S2疫苗株感染和用于存在布鲁氏菌S2疫苗株干扰的布鲁氏菌病的检测,从而提高布鲁氏菌病检测的准确性与可靠性。