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目的:1探讨AML患者SARI mRNA表达水平与疗效和预后的关系。2检测AML患者骨髓标本,从临床角度分析SARI基因与PI3K信号通路相关分子PI3K、Akt、mTOR、4EBP1、P70及转录因子c-myc、AML1、NF-κB、MZF-1、TWIST在不同阶段AML患者中的表达情况,并分析SARI表达与上述分子表达的相关性。3运用生物信息学软件预测SARI基因启动子区是否有转录因子c-myc、AML1、NF-κB、MZF-1、TWIST的结合位点、分析SARI基因启动子区的CpG岛。方法:1收集116例AML患者和30例正常对照的骨髓标本及其临床资料,AML患者中初治64例,缓解29例,复发7例,未缓解16例。采集骨髓标本单个核细胞,(1)应用qPCR检测SARI mRNA在不同阶段AML患者中的表达,根据SARI mRNA表达量将AML患者分为高表达组和低表达组,分析高、低组与临床特征的关系。(2)对初治的64例AML患者进行随访,其中跟踪获得同一位患者不同病程阶段骨髓标本的有12例,对其SARI mRNA的表达变化进行动态分析,并分析SARI表达水平与缓解率的关系。(3)采用电话、病例追踪等方式对AML患者进行随访,对AML患者的SARI mRNA表达及临床特征进行单因素生存分析、Cox风险回归模型进行多因素生存分析。2采用qPCR和Western blot分别检测AML患者和正常对照中SARI基因、PI3K信号通路相关分子PI3K、Akt、m TOR、4EBP1、P70和转录因子c-myc、AML1、NF-κB、MZF-1、TWIST的mRNA及蛋白表达,分析上述分子在不同阶段AML患者中的表达变化,并分析SARI表达与上述分子表达的相关性。3采用CONSITE、JASPAR数据库预测SARI基因启动子区的转录因子结合位点;采用CpG Island Searcher、CpG Finder等生物信息学软件分析SARI基因启动子区的CpG岛。结果:1(1)SARI mRNA在AML患者及正常对照中均有表达,SARI mRNA的表达量AML患者(0.2284±0.2097)低于正常对照(0.7775±0.4973),AML患者中缓解组(0.2715±0.1970)高于初治组(0.1988±0.1878)和复发组(0.1292±0.0348),差异均有统计学意义(p<0.05)。AML患者的SARI mRNA表达水平与年龄、性别、初治时外周血白细胞计数(WBC)、血红蛋白浓度(HGB)、血小板计数(PLT)及骨髓原始细胞计数差异均无统计学意义(p>0.05)。(2)对初治的64例AML患者进行随访,跟踪获得同一位患者不同病程阶段骨髓标本的有12例,其中有11位患者(92%)缓解期的SARI mRNA表达水平较初治高,仅有1位患者缓解期较初治低,对12例患者的SARI mRNA表达进行配对t检验分析发现,SARI mRNA的表达初治(0.1668±0.1619)低于缓解(0.3240±0.2391),差异有统计学意义(p<0.05)。AML患者中SARI mRNA的表达水平与缓解率呈正相关,SARI高表达组患者的缓解率(72.2%)高于未缓解率(27.8%),SARI低表达组患者的缓解率(42.5%)低于未缓解率(57.5%),差异有统计学意义(p<0.05)。(3)AML患者中,SARI mRNA高表达组患者的总生存时间(10.9792±7.4047个月)高于低表达组患(7.1029±5.5882个月);低WBC组(<10′109)、高HGB组(>80g/l)、低骨髓原始细胞计数(<50%)的AML患者总生存时间更长(p<0.05)。Cox比例风险回归模型分析显示SARI mRNA表达水平不是AML患者OS的独立影响因素(p>0.05);HGB和骨髓原始细胞计数是AML患者OS的独立影响因素,风险比HR分别为0.389和3.541,提示低HGB、高骨髓原始细胞计数的患者生存情况较差(p<0.05)。2 AML患者PI3K信号通路相关分子PI3K、Akt、4EBP1、P70的mRNA表达量初治组均高于缓解组,差异有统计学意义(p<0.05);mTOR初治组(1.2957±1.0526)高于缓解组(0.6509±0.5928),差异无统计学意义(p>0.05)。上述PI3K信号通路分子的复发组均高于缓解组(除PI3K外)、未缓解组高于缓解组(除mTOR外),差异均无统计学意义(p>0.05)。AML患者转录因子c-myc、AML1、NF-κB、MZF-1、TWIST的mRNA表达量初治组均高于缓解组,差异均有统计学意义(p<0.05)。c-myc、AML1复发组高于缓解组,差异有统计学意义(p<0.05);NF-κB、MZF-1、TWIST复发组高于缓解组,差异无统计学意义(p>0.05)。AML1、MZF-1未缓解组高于缓解组,差异有统计学意义(p<0.05);c-myc、NF-κB未缓解组高于缓解组,差异无统计学意义(p>0.05)。AML患者的SARI mRNA表达与PI3K信号通路相关分子和上述转录因子mRNA表达的相关性分析差异均无统计学意义(p>0.05),但为负向趋势关系。Western blot检测AML患者中SARI基因、PI3K信号通路相关分子和上述转录因子的蛋白表达,发现缓解期SRAI的蛋白表达高于初治和复发,PI3K信号通路相关分子和上述转录因子缓解期的蛋白表达低于初治,复发后有不同程度的升高;SARI蛋白表达较高的患者上述分子的蛋白表达较低,SARI蛋白表达较低的患者上述分子的蛋白表达较高,SARI与上述分子的蛋白表达结果亦呈负向趋势关系,蛋白表达变化与mRNA的表达变化一致。3 CONSITE和JASPAR数据库预测发现SARI启动子区有转录因子MZF1-4、AML1、NF-κB及MYC的结合位点;采用相应的生物信息学软件均显示未找到SARI启动子区的CpG岛。结论:1 AML患者的SARI mRNA表达水平与年龄、性别、WBC等临床特征无相关性。SARI基因在AML初治患者中表达较低,缓解期升高,复发后下降,且与AML患者的缓解率和总生存率呈正相关,可作为AML诊断、疗效和预后判断的辅助指标。2 PI3K信号通路分子和c-myc、TWIST等转录因子在AML初治患者中表达较高,缓解期下降,复发后升高,SARI基因与上述分子的表达统计学分析无相关,但为负向趋势关系。3 SARI启动子区有转录因子MZF-1、AML1、NF-κB及c-myc的结合位点,SARI可通过调控转录因子MZF、AML1、NF-κB、MYC的表达来发挥生物学作用。未发现SARI启动子区的CpG岛,在AML中,SARI启动子区的CpG岛异常导致SARI表达下调的可能性较小。