【摘 要】
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为了研究具有诱导粘膜免疫能力的流感疫苗,他们构建了表达流感毒血凝素(HA)的重组腺病毒.首先RT-PCR扩增流感病毒HA基因,将其克隆到5型腺病毒载体质粒pAD5C中.用重组质粒与Ec
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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为了研究具有诱导粘膜免疫能力的流感疫苗,他们构建了表达流感毒血凝素(HA)的重组腺病毒.首先RT-PCR扩增流感病毒HA基因,将其克隆到5型腺病毒载体质粒pAD5C中.用重组质粒与EcoR I酶切回收的5型腺病毒基因组大片段共转染了293细胞,通过PCR初步筛选得 到重组病毒.SDS-PAGE电泳,Westen Blot证明重组病毒能表达流感病毒的HA抗原.由于流 感病毒容易发生变异,研究具有交叉保护能力的疫苗一直是流感工作者追求的目标.M2蛋白是流感病毒的膜蛋白之一,在已经发现的几乎所有,甲型流感病毒中,M2的膜外区抗原决定簇高度保守,因此,被认为是开发具有交叉保护能力的理想的抗原.他们扩增了流感病毒A/PR8/34(H1N1)的M2基因,并克隆到大肠杆菌表达质粒pBV 222和pET32-a中.然而诱导表达时发现,带有M2基因重组质粒对受体菌的生长有强烈的抑制作用,不能获得表达.进一步实验表明,这种毒性作用不能被M2的拮抗药物金刚烷胺所抑制.通过PCR缺失M2蛋白对宿主菌的 毒性作用,对受体菌的生长明显抑制作用.在pET32-a获得了TrxA-Sm2融合蛋白,表达产物 ,免疫小鼠得到了M2特异性的抗血清.,间接免疫荧光实验表明,此血清能够特异结合到A/PR8/34感染的MDCK细胞的表面,说明表达的蛋白保持了流感病毒M2的抗原性.总之,该文构建了表达流感病毒HA的重组腺病毒,并利用基因缺失的方式在大肠杆菌中成功的表达了流感病毒M2蛋白的突变体sM2以及sM2-C3d的融合蛋白,制备了M2特异性的抗体,为研究开发新型流感 疫苗打下了基础._
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