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随着羊人工授精技术的大规模推广与应用,养殖企业和养殖户对羊精液的需求量也越来越大。然而,羊精液低温保存后存在保存时间短、精子活率低、受胎率不高等问题,这严重制约着我国养羊业的发展。羊精液低温稀释剂的深入研究将对加快育种进程、保持和扩大种群中优秀种公羊的优良基因等起到至关重要的作用。因此,探究高效稳定的羊精液低温稀释液配方成为关键,并且抗氧化物及低温保护剂的研究成为羊精液保存的有效研究导向。本试验选取褪黑素和盐酸多巴胺,探讨其在羊精液低温保存过程中的效果,首先从五种低温稀释剂中筛选出最佳保存效果的配方,然后向此配方中分别添加10、20、40、80 mg/L的褪黑素以及1、2、4、8 mg/L的盐酸多巴胺,通过检测精子常规指标、线粒体活性、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化氢酶(CAT)等,分析其对羊精液低温保存效果的影响。本研究获得的主要结果如下:1.在5种低温保存稀释液中,“配方3”保存效果最好,其主要成分是葡萄糖1.15 g、D-果糖1.45 g,PVA(聚乙烯醇)0.25 g、柠檬酸钠1.17 g、乙二胺四乙酸0.23g、碳酸氢钠0.125 g、青霉素5000IU、链霉素0.1 g。在羊精液保存第5 d时,精子活率为45.42%、精子质膜完整率为47.24%、顶体完整率61.26%,显著高于其他组(P<0.05)。“配方3”保存后精子的有效保存时间为3.2d,其次为“配方2”。在有效保存时间内,“配方2”稀释保存羊的精子活率、顶体完整率、质膜完整率显著低于“配方3”(P<0.05),但显著高于“配方4”和“配方5”(P<0.05);“配方1”的保存效果最差,显著低于其他组(P<0.05)。因此,将“配方3”作为后续研究的基础稀释剂。2.以“配方3”为基础稀释液,分别添加不同浓度的褪黑素,表明随着褪黑素浓度的添加,各处理组精子活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性及精液中T-AOC浓度呈现先升高后降低的趋势,精液中MDA含量则呈相反变化趋势。当褪黑素添加浓度为20 mg/L的时,精液保存5 d后,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性分别为49.73%、49.02%、67.43%和49.15%,显著高于其他组(P<0.05)。当褪黑素添加浓度为40 mg/L时,羊精液保存效果差于20 mg/L处理组,但精子线粒体活性、精液中T-AOC和MDA含量两组间差异不显著(P>0.05)。当褪黑素添加浓度为80 mg/L时,保存5 d各项指标均低其他组。因此,褪黑素最佳添加浓度为20 mg/L,而浓度大于40 mg/L时不利于羊精液保存。3.以“配方3”为稀释液分别添加不同浓度的盐酸多巴胺,表明添加适量的盐酸多巴胺有利于提高羊精液保存,其中当盐酸多巴胺的添加浓度为2 mg/L时保存效果最佳;保存5d后精子活率、质膜完整率、顶体完整、线粒体活性、T-AOC和CAT活性,分别为46.86%、49.22%、65.85%、46.25%、2.51 IU/mL和2.82U/mL显著高于其他各组(P<0.05)。当盐酸多巴胺的添加浓度达到4 mg/L时,保存1 d开始,各项指标明显降低;保存5 d后精子活率、质膜完整率、顶体完整、线粒体活性、T-AOC活性和CAT活性显著低于其他各组(P<0.05)。因此,2 mg/L盐酸多巴胺为羊精液低温保存的最适浓度。