【研究背景及目的】打击犯罪、伸张正义、告慰亡灵、侦破命案,是全体法医工作者的夙愿。溺死,作为法医日常工作中常见的死因之一,在法医学实践中是一个重要的课题。因为“生前溺死”和“死后抛尸”的鉴别和区分即便是在现有的科学和技术的帮助下仍然存在一些难度,而这两者又代表了两个完全不同的侦查思维方向。因此,如何在短时间内快速确定此类死者的死亡性质,并为案件侦破提供准确的侦查方向,对该类型的案件的侦破具有极其重要的意义。硅藻检验作为国内甚至世界范围内广泛被采用并投入大量实践的溺死诊断方法,在此类型的案件的侦查过程中经常扮演重要角色。硅藻检验的结果通常能够判定案件性质,可在案件侦查、审判中起到关键性证据的作用。开展硅藻相关科学研究,符合“证据科学”的发展方向和司法部门对案件侦查、审理的要求,保护人民最根本的利益,为新中国建设法治社会、依法治国提供坚实的证据基础。溺死的诊断在当前的法医学实践中仍然存在一些疑问,因为溺死本身缺少特征性的尸体征象,而水中尸体本身受环境的影响又非常大,这些可能的尸体征象又会在短时间内消失并在很大程度上受到尸体自身腐败的影响,因此增加了诊断难度。在实际工作中,若能严格管控硅藻检验过程中的污染因素,硅藻检验不失为一种可靠的检验方法。有文献报道称硅藻检验是溺死诊断的“金标准”,但是也因为一些客观存在的经验问题、设备问题、污染问题等,造成的漏诊或假阴性、假阳性的判断都会给案件性质的判断造成不小的困扰。同时,由于不同硅藻种类形状、大小不一,通过肺泡壁毛细血管的能力存在差异,不同藻属的阳性结果判定亦应存在差异,而关于硅藻检验的定量标准,现阶段并没有达成共识,故仍需进一步研究形成统一。如何排除以上这些问题的干扰,确定硅藻检验的定性定量标准,对确认溺死具有重要的价值。文献表明,在武汉市中心城区水域小环藻属是优势种属,对于小环藻属硅藻检验进行量化,可有助于武汉市中心城区水域中尸体检验的死亡原因及死亡方式判断。文献中报道的实验室硅藻检验方法很多,包括强酸消化法、酶消化法、Soluene-350法、微波消解法等等,这些方法或多或少有着操作麻烦、检出率低、费时费力、成本较高的缺陷。有的操作方法甚至会对环境和实验人员的身体健康造成损害,有的操作方法对实验室和设备要求极高,不适合集中应用和广泛推广。同时,现行的公安部硅藻检验实验标准使用3000~4000rpm离心机对待检器官消解液进行硅藻富集,该过程中存在大量的硅藻损失。微波消解-真空抽滤法经过实验研究及文献报道,克服了以上问题并具有消化彻底、节省试剂,方便高效、安全可靠,节能环保、成本低廉,灵敏度高、硅藻回收率高保存完好等优势,是很好的实验室硅藻检验方法并值得推广和应用。数字虚拟切片技术的应用和“三区四象限二野”法的使用为硅藻检验定量分析提供了可能,通过这两种方法,我们可以提高硅藻计数的准确性,更有利于实验人员对切片进行观察,较大程度排除客观性因素给观察者带来的干扰。本实验用纯度较高的小环藻属硅藻土和高纯度双蒸水,在不同硅藻浓度的条件下制造溺死水样模型,并利用该水样模型和SD大鼠成功建立不同硅藻浓度下的溺死模型。通过严格控制无污染的实验操作提取SD大鼠溺死模型的各个器官,并利用微波消解-真空抽滤法进行硅藻消解、富集后,用数字虚拟切片技术和“三区四象限二野”法对水样模型和各个器官中硅藻数量进行统计,试图构建以小环藻属为例的硅藻检验量化体系,结合以往的相关研究,为硅藻检验的可靠性和准确性提供依据和量化指标,具有重要意义。【材料和方法】实验对象为SD大鼠,分为溺死组、死后抛尸组和空白对照组。溺死组和死后抛尸组分别在4个不同浓度的小环藻属单一水样模型下进行10个个体的实验。观察实验现象后对大鼠进行解剖,提取器官后记录各个器官的质量,然后对各个器官进行微波消解-真空抽滤的硅藻检验,分别制作切片。通过光镜观察切片,并对小环藻属的硅藻进行计数,利用Microsoft Excel、SPSS 22.0 for Windows等软件进行统计分析。【实验结果】1.溺死组大鼠的各器官中硅藻阳性率与水样中硅藻浓度相关。2.溺死组大鼠各器官硅藻丰度与水样中硅藻浓度存在相关性,各器官间硅藻丰度值也存在相关性。3.肾、脾、心作为硅藻检验的器官,其敏感性较高。4.溺死实验组大鼠各个器官间的硅藻丰度值并不是相互孤立的,而是都存在相关性,其中肺和肝作为高检出率器官,其比值具有很高的辅助参考价值。5.空白对照组的大鼠各个器官中均未检测出硅藻。6.死后抛尸组大鼠各个器官内均未检测出硅藻。7.硅藻检验量化体系的建立在溺死诊断中具有重要意义。各个器官中硅藻丰度值与水样中硅藻浓度进行对比分析结果能在溺死的诊断和死亡地点的推断中提供有力支持。【实验结论】本课题利用最新的微波消解-真空抽滤技术进行了实验动物检材的硅藻消解与富集的过程,利用虚拟数字切片系统和“三区四象限二野”法进行硅藻定量分析,并从数据上证明了水样中硅藻浓度与单位质量检材样品中硅藻含量的相关性,并构建了各个器官的回归方程和量化体系,阐述了单位器官检材中硅藻检出值的意义,并进一步说明不能独立于水样中硅藻浓度而单独通过各个器官硅藻检验结果判断溺死。利用该量化体系肯定了硅藻检验的价值,并可以对源自不同水样的硅藻检验检材进行检出值的估计与分析,对硅藻检验结果的阳性判断和死亡地点推断有重要意义。