目的 研究靶向BCl-XL基因的小干扰RNA对胃腺癌MGC-803细胞BCl-XL基因表达的作用及对药物敏感性的影响。 方法 构建GFP和Bcl-XLsiRNA载体,琼脂糖凝胶电泳和测序证实序列的正确性。共转染GFP表达载体与GFPsiRNA表达载体或GFP与阴性siRNA到胃腺癌MGC-803细胞,48小时后荧光显微镜观察细胞GFP的表达。稳定转染Bcl-XLsiRNA或阴性siRNA到胃癌MGC-803细胞,G418抗生素筛选阳性克隆,克隆扩大培养,RT-PCR方法检测细胞mRNA表达,免疫荧光观察细胞蛋白表达。A0印迹观察细胞核形态的变化,流式细胞术观察亚G1细胞的比例。用不同浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,MTT观察细胞增殖的变化。用一种浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,流式细胞术观察亚G1细胞的比例。 结果 琼脂糖凝胶电泳初步鉴定提取质粒的大小,测序证实siRNA插入模板进行了正确连接。荧光显微镜结果表明,共转染GFP表达载体和GFPsiRNA表达载体的细胞比共转染GFP和阴性siRNA细胞的荧光强度明显减弱,GFP单独转染和GFP与阴性siRNA共转染细胞荧光强度没有明显的差别。RT-PCR和免疫荧光结果表明,Bcl-XLsiRNA稳定转染组细胞中Bcl-XLmRNA和蛋白的表达比阴性siRNA稳定转染组细胞Bcl-XL基因的表达均有明显的降低。