玫瑰花黄酮类化合物的提取、分离及生物活性研究

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玫瑰花是蔷薇科多年生灌木植物玫瑰的花蕾,是一种药食同源的花卉,具有良好的食用价值与保健功能。玫瑰花中含有多种生物活性物质,黄酮类化合物就是其中之一,本文的目的是对玫瑰花中的黄酮类化合物的制备工艺进行优化,研究其生物活性,分析其组成成分。1采用水浴提取法和微波辅助提取法提取玫瑰花黄酮(FOR),分别得出较优的提取条件。结果表明,水浴提取FOR的较优提取条件为时间4.5h、料液比1:45、乙醇浓度70%、提取温度65℃,在此条件下的提取率是82.54﹪;微波辅助提取FOR的较优条件为微波时间45min、料液比1:55、乙醇浓度65%、提取温度65℃、微波功率700W,在此条件下的提取率是82.29﹪。综合比较,本实验选择微波辅助提取法作为FOR的提取方法。2采用树脂吸附法对FOR进行纯化,通过静态和动态吸附解吸实验,筛选到AB-8大孔吸附树脂为较优的树脂,优化出FOR的纯化条件是上样浓度3.62mg/mL、上样流速2mL/min、洗脱液流速为1mL/min、洗脱液为70﹪乙醇、洗脱液用量为2BV,在此条件下,得到的黄酮纯度为32.45﹪,比纯化前的5.23﹪提高6.20倍,回收率为88.67﹪。3研究了FOR的清除自由基的能力。清除自由基实验表明,FOR对O2、·OH、DPPH·具有一定的清除能力。不同极性溶剂的萃取物清除O2、·OH、DPPH·的能力不同,清除DPPH·实验测得乙酸乙酯萃取物、水萃取物、正丁醇萃取物和AB-8树脂纯化物的IC50分别为6.52μg/mL、6.87μg/mL、9.04μg/mL、6.34μg/mL;清除O2实验测得在浓度为100μg/mL时,正丁醇萃取物、水萃取物、乙酸乙酯萃取物和AB-8树脂纯化物的抑制率为27.83%、23.21%、14.43%、21.94%;清除·OH的实验测得在浓度为500μg/mL时,正丁醇萃取物、水萃取物、乙酸乙酯萃取物和AB-8树脂纯化物的抑制率分别为43.51%、32.75%、23.74%、27.60%。结果表明FOR具有一定的清除自由基能力,玫瑰花中不同的黄酮组分可能导致了不同的黄酮萃取物拥有不同的清除自由基的能力。4研究了FOR对四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的降糖作用。以AB-8大孔吸附树脂纯化的FOR为原料,按三个剂量灌胃四氧嘧啶诱导的糖尿病模型小鼠,共28d,检测小鼠血糖(SG)的变化及其肝脏中丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果表明,FOR(黄酮含量32%)能够显著降低糖尿病模型小鼠的SG水平,以300mg/ Kg*d为最适剂量,降糖率达到26.0﹪;FOR能够显著降低肝脏中MDA的含量,增加肝脏中SOD和GSH-Px的活性。结果表明,FOR对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠具有降血糖作用,能够增加肝脏中抗氧化酶的活性。5通过Sephadex LH-20的初步分离、HPLC的分离和紫外吸收光谱的分析,确定玫瑰花黄酮类化合物中至少有五种黄酮单体,经鉴定其中一种黄酮单体为木犀草素。
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