【摘 要】
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在畜牧养殖过程中,动物机体极易因外界刺激而诱发炎症,过度的炎症会致使机体出现不可逆的损伤,容易造成动物的死亡,给养殖户带来额外的损失。临床上常用的甾体、非甾体类的抗炎药长期使用会对机体产生严重毒副作用。因此需要开发新的低毒,不易产生耐药性的新抗炎化合物。藤黄酸(Gambogic acid)是从中药藤黄中提取的笼状呫吨酮类化合物,为主要活性成分之一。近年来的研究表明,其具有抑制肿瘤细胞增殖、抗炎、抗
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在畜牧养殖过程中,动物机体极易因外界刺激而诱发炎症,过度的炎症会致使机体出现不可逆的损伤,容易造成动物的死亡,给养殖户带来额外的损失。临床上常用的甾体、非甾体类的抗炎药长期使用会对机体产生严重毒副作用。因此需要开发新的低毒,不易产生耐药性的新抗炎化合物。藤黄酸(Gambogic acid)是从中药藤黄中提取的笼状呫吨酮类化合物,为主要活性成分之一。近年来的研究表明,其具有抑制肿瘤细胞增殖、抗炎、抗病毒和神经保护等多种生物活性。但藤黄酸水溶性极低,严重限制临床应用。聚乳酸嵌段共聚物(m PEG-PLA),具有良好的生物相容性、无毒性、生物可降解性、体内长循环性等。因此本研究尝试通过利用聚乳酸嵌段共聚物制备藤黄酸纳米粒来提高藤黄酸的溶解度性,从而提高其抗炎作用。本试验使用乳化溶剂挥发法制备,采用超速离心法分离得到藤黄酸聚乙二醇聚乳酸嵌段共聚物纳米粒(GA-m PEG-PLA-NPs),紫外分光光度法检测GA-m PEG-PLA-NPs中GA的含量;使用单因素考察处方中可以显著影响包封率的因素,并采取Box-Behnken响应面设计对其处方制备方法进行优化。优化得到最优处方,并对最优处方制备的GA-m PEG-PLA-NPs粒径,外观,zeta电位,体外释放行为进行考察。通过单因素考察及响应面试验确定了藤黄酸纳米粒的最佳制备处方搅拌时间为92 min,药物与载体的质量比为1:35,PVA浓度为2.5%,有机相和水相的比例为1:2。此时藤黄酸纳米粒的包封率为65.79±1.02%。纳米粒的粒径平均径为338.9 nm左右;Zeta电位为-10.2 m V;透射电镜下可以观察到大小均一,分散均匀的圆形纳米颗粒。纳米粒48 h的体外释放度为52.38%,具有一定缓释作用。为了评价GA-m PEG-PLA-NPs在体内外的抗炎作用,建立了LPS诱导的R AW264.7炎症模型及小鼠急性肺损伤模型。MTT法检测GA-m PEG-PLA-NPs对RAW264.7的细胞毒性。通过Griess法检测体内外炎症模型中NO的含量,使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及PGE2的含量。GA-m PEG-PLA-NPs对RAW264.7的IC50的值为12.55μM,且0-2μM的GA-m PEG-PLA-NPs不会影响RAW264.7的细胞活力。GA-m PEG-PLA-NPs跟GA同样可以降低炎症细胞模型中炎症介质NO、PGE2的表达量,抑制促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的生成,促进IL-10的表达。体内共同作用5 d,同浓度下GA-m PEG-PLA-NPs的抗炎活性高于GA。从而确认制备的GA-m PEG-PLA-NPs具有低毒、缓释作用,及较好的抗炎活性。
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