目的：从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化神经生长因子(nerve growth factor，NGF)，并测定其纯度和活性；克隆编码成熟NGF的cDNA序列，构建其真核表达载体pcDNA3,1(-)-NGF，并在哺乳动物细胞NIH3T3中进行表达。 方法：采用Sephadex G-75柱层析和CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱层析从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化神经生长因子，洗脱峰各管对抗NGF抗体进行双向免疫扩散，收集免疫反应阳性峰。用SDS-PAGE、PC12细胞分别进行纯度鉴定和活性测定。 用Trizol试剂从眼镜蛇毒腺中提取总RNA，采用RT-PCR的方法逆转录合成第一链cDNA，并根据广西眼镜蛇cDNA序列和表达载体的特征设计和合成上下游引物，进行PCR扩增；将目的基因、真核表达载体pcDNA3,1(-)分别经Kpn I和Xho I单酶切，酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳并分别进行胶回收；将目的基因与载体连接后转化大肠杆菌DH16B从而构建重组载体pcDNA3,1(-)-NGF，经酶切和测序对重组体进行鉴定。利用脂质体LipofectamineTM2000方法转染NIH3T3细胞，对阳性克隆培养上清中NGF的表达用SDS-PAGE、Western-Blot的方法来检测。 结果：通过凝胶排阻色谱和阳离子交换柱层析，得到两个主要样品，分子量分别为13KD和23KD，用PC12细胞测定两样品均有NGF活性。 重组载体pcDNA3,1(-)-NGF经酶切、测序分析，插入的基因片段为表达蛇毒NGF的基因，NGF基因在NIH3T3细胞中获得表达。 结论：分离纯化出神经生长因子，经测定具有生物学活性；成功从广西眼镜蛇毒腺中克隆出编码成熟NGF的cDNA序列，并成功构建了真核表达载体pcDNA3，1(-)-NGF，同时检测出在哺乳动物细胞NIH3T3中表达。