君子兰生殖生物学基础及种质资源分子标记研究

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君子兰(Clivia miniata),石蒜科(Amaryllidaceae),君子兰属(CliviaLindl.),多年生草本植物。君子兰全株入药,并且具有观赏价值。该属共包括6个二倍体种,大花君子兰(C.miniata)是我国北方常见的栽培品种。本文以大花君子兰为试验材料,观察其不同花期雄核发育进程,研究其花粉生活力的测定方法,研究其开花特性、柱头可授性和自交不亲和性机制,研究其有性繁殖和无性繁殖育种技术的特点;并且以大花君子兰和垂笑君子兰为试验材料,利用微卫星分子标记技术对其进行亲缘关系分析。主要结果如下:对61个试验样本进行DNA扩增,其中大花栽培品种51个,8个垂笑品种,2个大花和垂笑的杂交品种。来自大花君子兰的11对引物(CM3, CM9, CM12, CM54, CM65, CM103, CM137, CM253, CM289, CM357, CM425)和来自垂笑君子兰的3对引物(CN68, CN89, CN106)在目的片段区出现清晰的扩增子。聚丙烯酰胺变性凝胶电泳检测结果,其中4对引物(CM3, CM253, CM425, CN89)为单态,10对引物具有多态性。其创新点是首次采用微卫星分子标记筛选10对可靠的、有效的遗传学分子标记物,为君子兰物种的系统发育关系及遗传学多样性研究提供了有用的信息。利用荧光显微技术观察君子兰柱头可授性和自交不亲和现象,结果表明君子兰开花2-3天后柱头具有强可授性,君子兰花粉管中不规则出现的胼胝质塞影响花粉管的正常发育,柱头上也可见胼胝质出现,导致花粉管不能正常进入柱头。浓度1%-5%的NaCl溶液能够有效地克服君子兰自交不亲和性;在NaCl溶液中添加0.3-0.5%的H3BO3溶液可以对其作用效果略有提高。其创新点是解决了君子兰自交育种的障碍,为克服自交不亲和配制杂种一代工作奠定基础。本文明确地将君子兰的花期划分为5个时期,确定不同时期的形态特征,并且研究了各个时期花药发育特点和雄核发育进程。结果表明君子兰在现蕾期阶段小孢子处于单核期或者单核靠边期,这一时期的花粉适合做单倍体培养的外植体选材。同时筛选了花粉活力的最佳测定方法是I:-KI染色法;花粉的萌发的最佳培养基配方是MS液体培养基+NAA0.5mg/L+2,4-D0.1mg/L.其创新点在于为小孢子培养奠定了理论基础。本文对君子兰的开花特性和花莛的生长规律进行了研究。结果表明君子兰花莛生长存在“慢-快-慢”的周期,生长曲线呈“S”型。浓度50-100mg/L的GA3溶液能够有效促进花莛长度生长。其创新点在于研究花莛快速生长的时间,为栽培工作确定最佳的肥水调控时机,以便调控君子兰花莛的长度生长。通过对君子兰的无性繁殖方式进行研究发现“抹头”和“折箭”这两种处理方法可以促进君子兰脚芽萌发;利用君子兰未授粉子房和胚珠进行组织培养,出愈率最高的外植体形式是胎座+胚珠;最佳培养基配方是MS+琼脂0.8%+蔗糖3%+2,4-Dlmg/L+KT2mg/L;最佳培养方式是固-液双层培养。最适合播种的种子是种粒饱满的中等大小种子,并且随采随播。
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