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目的:研究缩宫素(oxytocin,OT)预处理对胎鼠海马脑片缺氧无糖损伤后催产素受体(oxytocin receptor,OTR)、γ-氨基丁酸A受体β1亚基(gamma-amimobutyric acidreceptor Aβ1 subunit,GABAARβ1)表达的影响,探讨OT神经保护的作用及机制。
方法:①研究材料:孕龄20天健康普通级SD孕鼠8只,体重500~800g。②离体胎鼠海马脑片制备:孕鼠剖宫产娩出胎鼠,迅速剥出胎鼠全脑并切割成厚2-3mm的脑片,置于温度为(32.0±0.5)℃的人工脑脊液(artificial cerebral spinal fluid,ACSF)中并通入混合气体95%O2、5%CO2孵育2~3 h备用。③分组与药物干预方式:对照组10例海马脑片经正常ACSF孵育后直接行缺氧无糖(oxygen and glucose deprivtion,OGD)15min,实验组将正常ACSF换成含设定浓度OT(依次为低10-8mol/L、中10-6mol/L、高10-4mol/L剂量三组各10例)的ACSF孵育,余同对照组。④检测指标:苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)、透射电子显微镜(transmission electronmicroscopy,TEM)观察海马CA3区神经元损伤情况,免疫组织化学法半定量测定该区域OTR、GABAARβ1表达变化。
结果:①HE染色结果:对照组海马CA3区神经细胞层次变少,排列紊乱、稀疏,部分神经细胞核深染、固缩,核缩小呈梭形或三角形,核仁不明显;实验组神经细胞呈多层排列、数目多,结构清晰,排列较整齐紧密、分布亦较均匀,神经细胞外形规则,胞核呈圆形或椭圆形,染色较淡,偶见核深染或固缩,核膜边界清晰,中剂量组上述改变较低剂量组改善,而高剂量组又优于中剂量。②TEM观察结果:对照组大量核固缩或碎裂,部分核膜溶解,染色质呈团块状凝集,核仁碎裂,胞质内细胞器明显减少,电子密度低;实验组细胞器增多,细胞核、粗面内质网、线粒体均较对照组有所改善,核膜较光滑,染色质细小而分散,胞浆肿胀较对照组减轻,可见核膜皱褶内陷,核固缩,染色质凝集、边集等凋亡现象。③免疫组织化学染色结果:实验组与对照组胎鼠海马CA3区OTR免疫组织化学染色均有阳性反应,实验组OTR表达平均光密度值与对照组比较显著升高(P<0.05),各剂量亚组间OTR表达平均光密度值随OT预处理浓度梯度上升逐渐升高,组间比较具有统计学意义(P<0.05),提示OTR表达与OT预处理浓度呈正相关。实验组与对照组海马CA3区GABAARβ1免疫组织化学染色亦均有阳性反应,实验组GABAARβ1表达平均光密度值较对照组显著升高(P<0.05),中剂量亚组GABAARβ1表达较低剂量组升高(P<0.05),中、高剂量组间GABAARβ1表达差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:①OT预处理可减少胎鼠海马脑片OGD损伤后神经元变性、坏死及凋亡,对神经元具有保护作用。②OT上调胎鼠海马神经元胞膜OTR、GABAARβ1表达,可能与OT的神经保护作用有关。