目的:乳腺癌(Breast Cancer)是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率较高。据统计,2015年在全国女性中,乳腺癌新发病例约为26.9万例,占女性肿瘤发病率的15%;全国女性乳腺癌死亡约7.0万例,占女性肿瘤死亡率的7%。乳腺癌发病高危因素多种多样,如年龄、遗传家族史、电离辐射、生育因素、哺乳因素、体重、饮食习惯、精神心理因素等,但是至今乳腺癌的发病机制仍不清楚,目前也缺乏有效的诊疗标志物和诊断方法。乳腺癌发现越晚,治疗难度越大,生存几率越小,故筛查乳腺癌早期发生的分子诊断标志物,并进一步寻找针对性的治疗药物靶点具有重要的临床和社会意义。蛋白质组学(proteomics)技术检测细胞或者组织在不同病理、生理条件下蛋白质的表达,可对相关蛋白质进行分类和鉴定,并且分析蛋白质的功能。本实验拟收集健康人、乳腺癌患者和良性乳腺病患者血清,行蛋白质组学研究,初步建立健康人、乳腺癌、良性乳腺病血清双向电泳图谱,筛查差异蛋白质点,进一步分析、鉴定差异蛋白点,为寻找新的乳腺癌早期的分子诊断物奠定基础;并为下一步深入探讨上述关键蛋白的作用,揭示乳腺癌发生发展的分子基础提供了实验依据。方法:收集西南医科大学第一附属医院乳腺外科乳腺癌患者血清及良性乳腺病患者血清各10例,另收集西南医科大学体检中心健康人血清10例,将标本分为3组:(1)健康人组与乳腺癌组;(2)良性乳腺病组与乳腺癌组;(3)健康人组与良性乳腺病组,采用双向电泳(two dimensional electrophoresis,2-DE)技术分离蛋白,通过PDQuest软件筛选健康人、乳腺癌和良性乳腺病血清表达差异的蛋白样点,进一步使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionizationtime of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质。最后重新收集健康人、乳腺癌血清标本各4例,通过western blot方法验证差异蛋白。结果:初步建立健康人、乳腺癌、良性乳腺病血清双向电泳图谱,利用PDQuest软件分析2-DE电泳结果,共检测出22个差异蛋白点。(1)组以健康人组为参照,乳腺癌组表达上调斑点有18个,编号为(1-7、9-19),表达下调斑点有4个,编号为(8、20-22)。(2)组以良性乳腺病组为参照,乳腺癌组表达上调蛋白点7个,编号(6、15-17、20-22),表达下调蛋白点有有15个,编号(1-5、7-14、18-19)。(3)组以健康人组为参照,良性乳腺病组表达上调蛋白点有19个,编号(1-9,10-19),表达下调蛋白点有3个,编号(20-22)。对差异蛋白样点进行取样、胶内酶切、质谱鉴定,成功鉴定6个与乳腺癌相关的差异蛋白点,通过Mascot图谱匹配软件检索PROT数据库最终确定上述蛋白点对应的蛋白质分别为锚蛋白-3亚型X7(ankyrin-3 isoform x7)、角蛋白9(keratin,type I cytoskeletal 9)、肌张力异常蛋白亚型CRA_b(dystonin,isoform CRA_b)、微管微丝交联因子1亚型4(microtubule-actin cross-linking factor 1 isoform 4、MACF1)、核膜血影重复蛋白2亚型X11(nesprin-2 isoform X11)、轴丝动力蛋白10亚型X9(Dynein heavy chain 10,axonemal isoform X9)。进一步选择角蛋白9进行蛋白质印迹法(Western blot)验证,发现角蛋白9在乳腺癌组中表达和较健康人组显著增高,与蛋白质组学结果一致。结论:初步建立了健康人、乳腺癌、良性乳腺病的双向电泳图谱,通过分离蛋白、鉴定蛋白,初步在3组中筛选出6种与乳腺癌相关的表达差异蛋白质,这6种蛋白质可能成为乳腺癌的早期诊断标志物;进一步对角蛋白9进行Western blot验证,发现角蛋白9在乳腺癌组中表达较健康人组显著增高,与蛋白质组学结果一致。这些结果为下一步深入探讨上述关键蛋白的作用,揭示乳腺癌发生发展的分子基础提供了实验依据。