背景:脊髓损伤发病率逐年攀升,其高致残率给社会及家庭带来沉重负担。近年来,组织工程神经支架等治疗方法已被证实可以修复脊髓损伤,但仍存在一定局限性。中医药凭借多靶点、低副反应的优势被越来越多地关注,有望弥补现有治疗方法的局限性。课题组前期研究表明,中药复方脊髓康临床治疗脊髓损伤疗效确切,动物实验研究证实了脊髓康的脊髓修复作用并部分阐明了其作用机制。目的:从调节肠道菌群、小胶质细胞组蛋白乙酰化角度阐明脊髓康的脊髓修复作用机制。方法:动物实验部分采用2×2析因设计,将64只C57BL/6小鼠用分层区组随机化法分为4组,假手术+生理盐水组(SN组)、假手术+脊髓康组(SJ组)、脊髓损伤+生理盐水组(MN组)、脊髓损伤+脊髓康组(MJ组)。采用落重法进行脊髓损伤造模。术后于恒温恒湿的清洁环境中单笼饲养,记录小鼠一般情况、体重,并使用BMS评分及斜板试验评估运动功能。术后7d、14d、21d、28d取小鼠粪便,术后28d取小鼠血浆与脊髓组织,气相色谱-质谱联用检测粪便及血浆中短链脂肪酸含量,16s rDNA测序检测粪便中肠道菌群组成,苏木素伊红染色观察脊髓病理学变化,免疫组织化学染色检测脊髓组织中组蛋白乙酰化水平及小胶质细胞活化情况,免疫荧光多标染色标记脊髓组织中不同种类细胞标志物分析各种细胞的功能状态。细胞实验部分采用永生化小胶质细胞BV-2作为实验对象,使用斑点印记杂交法筛选不同浓度的各种短链脂肪酸对BV-2细胞组蛋白H3、H4不同乙酰化位点的乙酰化水平调节作用,并使用蛋白质免疫印迹法加以验证。随后使用酶联免疫法、实时荧光定量聚合酶链式反应检测BV-2细胞不同炎症相关因子的表达,判断BV-2细胞活化状态。使用免疫细胞荧光染色法检测BV-2细胞活化标记物Iba1的表达水平。用CCK-8法检测各组短链脂肪酸对BV-2细胞增殖的影响。结果:脊髓损伤造模可显著降低小鼠体重、BMS主评分与副评分、斜板试验角度,导致脊髓背侧白质萎缩,增加脊髓组织TREM2表达及H3K27乙酰化水平,降低Iba1、CD13、GFAP表达和H4K8乙酰化水平,使肠道菌群多样性下降,并降低血浆中丙酸、丁酸、异丁酸浓度,一定程度上影响了粪便中短链脂肪酸浓度。脊髓康则可改善小鼠BMS主评分与副评分,减轻脊髓背侧白质萎缩,增加脊髓组织Iba1、NeuN、CD13、GFAP、TREM2表达和H3K27乙酰化水平,降低Iba1表达和H4K8乙酰化水平,使脊髓损伤小鼠肠道菌群多样性增加,但降低假手术小鼠的肠道菌群多样性。脊髓康对小鼠血浆及粪便短链脂肪酸含量有一定调节作用。离体实验结果显示:不同种类、浓度的短链脂肪酸与TSA对BV-2细胞增殖有抑制作用,可同时调节BV-2细胞TREM2表达与H3K27、H4K8乙酰化,不同程度提高IL-4及IL-13水平,降低IL-10、TNF-α、iNOS、Iba1水平,对TREM2基因表达有抑制作用,对TNF-α、IL-10、Arg1基因表达有促进作用,对iNOS、Mincle基因表达的作用随时间变化而改变。结论:脊髓康可能可以通过调节肠道菌群改变血浆中短链脂肪酸含量,通过短链脂肪酸的促组蛋白乙酰化作用使小胶质细胞向M2a型和M1型活化,减轻脊髓继发性损伤,保护神经元及白质,最终促进小鼠后肢运动功能恢复。