【摘 要】
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梧桐花粉是人类室外过敏原的主要来源之一,由此会引起过敏性哮喘、过敏性鼻炎、皮肤炎等疾病。目前,已有三种梧桐花粉过敏原被鉴定出来,分别是Pla a 1,Pla a 2和Pla a 3。Pla a 1是一种分子量为18kDa的酸性蛋白,在西欧城市,90%以上的法国梧桐花粉过敏症患者对Pla a 1过敏。Pla a 2是一种糖基化蛋白,在全球对梧桐花粉过敏的患者中,84%可以找到此变应原。Pla a 3
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梧桐花粉是人类室外过敏原的主要来源之一,由此会引起过敏性哮喘、过敏性鼻炎、皮肤炎等疾病。目前,已有三种梧桐花粉过敏原被鉴定出来,分别是Pla a 1,Pla a 2和Pla a 3。Pla a 1是一种分子量为18kDa的酸性蛋白,在西欧城市,90%以上的法国梧桐花粉过敏症患者对Pla a 1过敏。Pla a 2是一种糖基化蛋白,在全球对梧桐花粉过敏的患者中,84%可以找到此变应原。Pla a 3是一种非特异性的脂质转移蛋白,45%左右的西班牙地区梧桐花粉过敏症患者对Plaa3过敏。本研究主要目的是对两种梧桐花粉主要过敏原Pla a 1和Pla a 3在大肠杆菌表达系统进行表达和纯化并完成单克隆抗体制备的研究,为Plaa1和Plaa3在梧桐过敏的临床诊断应用和脱敏疫苗的研制方面提供一定的试验依据。论文分为两部分:第一部分:Plaa1和Plaa3在大肠杆菌表达系统的表达和纯化。将人工合成的目的基因Pla a 1和Pla a 3全序列连接到载体,获得的重组质粒转入至Arctic Express表达菌株中,加入0.5 nM IPTG诱导4 h;将获得的重组蛋白超声破碎并4度离心10分钟,4度离心20分钟收集包涵体,溶液上清或包涵体通过镍柱亲和层析,洗脱得到纯化重组蛋白;第二部分:Plaa1和Plaa3的单克隆抗体的制备。用纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,多次免疫,尾静脉采血测定血清效价后,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,并用HAT筛选得到稳定的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞株注射到液体石蜡预处理的小鼠腹腔,隔周取腹水,Protein G亲和纯化单抗,得到单克隆抗体。
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