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实验目的建立AA亚慢性染毒小鼠模型,研究AA对小鼠睾丸组织的生殖毒性作用,以及AA染毒后细胞骨架CK18与细胞凋亡相关因子Fas、FasL和Caspase-3表达的变化及其相互关系,进而为研究生殖细胞凋亡通路及分子调控机制,以及探讨AA的生殖毒性机制提供实验依据。实验内容与方法将健康5-6周龄清洁级雄性昆明种小鼠40只,随机分为4组,每组10只。用不同剂量的AA(0、10、20、40mg/kg)对小鼠连续腹腔染毒5周,每周6天,其中对照组给予等体积蒸馏水。每日测量体重,于首次染毒AA后第36天处死小鼠,计算睾丸系数。采用组织病理学技术(HE染色),RT-PCR技术,免疫组织化学法,分别从组织学水平,mRNA水平,蛋白水平,分析AA对小鼠睾丸组织的生殖毒性作用、CK18与细胞凋亡相关因子Fas、FasL和Caspase-3表达的变化及其相互关系。实验结果1、AA染毒期间,小鼠体重、睾丸重量及其睾丸系数均呈下降趋势,与对照组相比有统计学差异(P<0.01)。2、HE染色结果显示,10mg/kg组与正常对照组比较,小鼠睾丸曲细精管排列基本规则,各级生精细胞未见明显改变。20mg/kg和40mg/kg剂量组小鼠,曲细精管排列不规则,生精上皮层次减少,各级生精细胞减少,管腔内成熟精子减少。3、RT-PCR及免疫组化结果显示,CK18mRNA及蛋白在正常小鼠睾丸组织有表达；20mg/kg和40mg/kg剂量组与正常对照组比较,CK18mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01)。4、小鼠睾丸组织Fas、FasL、Caspase-3的表达,对照组生精小管中有散在分布的个别阳性细胞,10mg/kg组阳性细胞不明显；20mg/kg组和40mg/kg组阳性细胞增多,IOD值较正常对照组均明显增多,且有统计学差异(P<0.01)。结论1、AA亚慢性染毒可致小鼠体重增长缓慢,睾丸系数降低。2、AA亚慢性染毒可使小鼠睾丸结构发生病理性改变,成熟精子减少,生精功能降低。3、AA致小鼠睾丸组织CK18mRNA及蛋白的表达显著减少。推测AA生殖毒性作用的可能机制为AA染毒使CK18mRNA表达减少,从而导致CK18生成减少。4、AA可诱导小鼠睾丸组织细胞凋亡相关因子Fas、FasL与Caspase-3表达增加,从而激活Fas/FasL凋亡通路。表明在AA生殖毒性中存在着Caspase-3的依赖性凋亡机制。5、CK18mRNA和蛋白的表达与Fas、FasL、Caspase-3的表达均呈负相关,表明AA诱导睾丸Fas、FasL、Caspase-3表达增加与CK18表达减少有一定的相关性。