【摘 要】
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本课题瞄准紧密化发育事件的时间点,收集紧密化发生前的胚胎——8-细胞早期胚胎和紧密化刚刚发生的胚胎--8-细胞紧密化胚胎两种标本,将SMART-PCR方法与抑制消减杂交技术(supp
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本课题瞄准紧密化发育事件的时间点,收集紧密化发生前的胚胎——8-细胞早期胚胎和紧密化刚刚发生的胚胎--8-细胞紧密化胚胎两种标本,将SMART-PCR方法与抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)相结合,克服取材困难的制约因素,分离、克隆和筛选代表8细胞早期胚胎和紧密化8细胞胚胎差别表达基因的ESTs;并通过生物信息学方法对这些EST进行同源比较分析,阐明所获ESTs的生物学功能.并且在此基础上,从代表8-细胞早期胚胎和紧密化8-细胞胚胎差别表达基因的ESTs出发,克隆了小鼠植入前胚胎紧密化相关基因Crgl,并检测了该基因的组织表达谱,运用生物信息学方法对该基因的功能进行了初步分析.研究还表明早期胚胎各个时期的基因表达是处于动态变化之中的.要了解这些表达变化的基因在胚胎早期发育的各个阶段起着什么样的作用,我们首先要弄明白是那些基因发生了明显的变化,其表达变化的模式是怎样的.然后我们再来看这些有着其自身表达变化模式的基因具有什么功能,它们在发育过程中起着什么作用.为避免收集足够数量的早期胚胎而耗费大量的时间、精力和经费,我们充分利用网上的各种生物信息资源,借助公共的ESTs数据库,利用NCBI中的数字差异展示(digital differential display,DDD)软件,以及前人已构建的早期胚胎六个时期的cDNA文库,调查早期胚胎发育过程中各个阶段的基因表达谱系的变化.进一步根据表达差异基因在各个时期的表达量及变化趋势进行归类列表,并转化为曲线表达模式图,勾画出早期胚胎基因表达变化的整体印象,为研究早期胚胎发育机理提供线索.
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