论文部分内容阅读
目的探讨功能性P-糖蛋白在膀胱癌不同细胞株间是否存在选择性转移及其机制。方法用Transwell将膀胱癌耐药株细胞BIU-87/ADM分别与敏感膀胱癌细胞株T24和EJ进行共培养,共聚焦显微镜观察共培养Transwell下室的T24和EJ细胞(即获得性耐药细胞Aq MDR)P-糖蛋白的转移,利用Western Blot检测BIU-87/ADM、T24/aq MDR、T24、EJ/aq MDR及EJ细胞P-gp的表达量,利用RT-PCR分析这些细胞MDR1 m RNA的表达水平。采用流式细胞术测BIU-87/ADM、T24/aq MDR、T24、EJ/aq MDR及EJ细胞内罗丹明-123荧光强度。利用RT-PCR分别对BIU-87/ADM、BIU-87、EJ、T24细胞中几种介导肿瘤细胞间恶性特质转移的细胞膜蛋白或受体(CD44分子、Ezrin蛋白、整合素b1)的m RNA表达情况进行检测。结果共聚焦结果显示这些细胞核均呈蓝色荧光,胞浆和胞膜呈不同程度的绿色荧光,BIU-87/ADM呈强绿色荧光,T24/aq MDR呈中等强度绿色荧光,而T24、EJ/aq MDR及EJ细胞均呈现弱绿色荧光。Western Blot检测结果显示,BIU-87/ADM细胞中P-gp的表达水平最高,T24/aq MDR细胞中P-gp的表达弱于BIU-87/ADM细胞(p<0.05),却明显强于T24细胞(p<0.05),而EJ/aq MDR和EJ细胞中P-gp表达水平均较低。RT-PCR结果显示,只有BIU-87/ADM细胞中MDR1 m RNA表水平较高,而其余四种细胞表达水平很低且彼此间差异无统计学意义(p>0.05)。罗丹明123试验显示:BIU-87/ADM、T24/aq MDR、T24、EJ/aq MDR及EJ细胞内荧光强度依次增高,其中T24、EJ/aq MDR及EJ细胞中荧光强度均较强且彼此间差异亦无统计学意义(p>0.05)。RT-PCR检测CD44分子、Ezrin蛋白、整合素b1在七种细胞中表达水平均较高,但彼此间差异也无统计学意义(p>0.05)。结论P-gp能够从耐药的膀胱癌细胞株BIU-87/ADM转移到敏感的膀胱癌细胞株T24中,且这种获得性P-gp具有药物外排功能。而P-gp不能或者很少量从耐药的膀胱癌细胞株BIU-87/ADM转移到敏感的膀胱癌细胞EJ中。在共培养前后P-gp转移的过程中不伴有多药耐药基因MDR1的转移。这一现象说明P-gp在膀胱癌不同细胞株间转移具有选择性,在以微粒(MPs)介导的膀胱癌细胞株间P-gp转移的机制中,CD44分子、Ezrin蛋白、整合素b1在各种细胞中表达均无明差异,即无充分证据支持这些粘附分子参与了P-gp在膀胱癌细胞间的转移,这也为进一步研究P-gp介导的膀胱癌多药耐药的机制提供了新的思路及研究方向。