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第一部分T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3在急性胰腺炎早期阶段中的表达及意义目的T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T-cell immunoglobulin and mucin domain 3,Tim-3)在炎症反应中起着重要的免疫调节作用。目前关于Tim-3在急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)中的作用研究很少。我们进行了一项前瞻性临床研究来探讨Tim-3在AP早期阶段中的表达及意义。方法采用前瞻性/病例对照研究的方法,选择44例AP患者作为研究组,其中16例轻型急性胰腺炎(Mild组),28例非轻型急性胰腺炎(None-mild组)。20名健康志愿者作为阴性对照组(NC组)。流式细胞术检测各组外周血单核细胞表面Tim-3的表达水平。ELISA法检测各组外周血血清白介素(interleukin,IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和血清可溶性Tim-3(soluble Tim-3,sTim-3)水平。结果AP组(Mild组和None-Mild组)血清促炎因子IL-6和TNF-α水平明显高于NC组。在AP分组中,None-Mild组血清促炎因子IL-6水平和TNF-α水平均高于Mild组。AP组(Mild组和None-Mild组)血清抗炎因子IL-10水平明显高于NC组。在AP分组中,None-Mild组血清抗炎因子IL-10水平低于Mild组。AP组(Mild组和None-Mild组)血清sTim-3水平明显高于NC组。在AP分组中,None-Mild组血清sTim-3水平明显高于Mild组。AP组(Mild组和None-Mild组)外周血单核细胞表面Tim-3的表达水平明显高于NC组。在急性胰腺炎分组中,None-Mild组外周血单核细胞表面Tim-3的表达水平明显低于Mild组。相关性分析提示血清sTim-3水平和促炎因子IL-6、TNF-α存在相关性,且呈正相关。血清sTim-3和抗炎因子IL-10无相关性。血清sTim-3水平和APACHEⅡ评分存在相关性,且呈正相关。结论Tim-3参与了AP早期阶段炎症反应的免疫调节。血清sTim-3可作为早期预测AP严重程度的生物标志物。第二部分Tim-3在小鼠重症急性胰腺炎早期阶段中的免疫调节作用及机制的实验研究目的炎症反应的免疫调节在AP的发生发展中起着重要的作用。在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)早期,过度的炎症反应是主要的病理生理过程。Tim-3被认为是理想的炎症免疫治疗靶点。方法选择BALB/c雄性小鼠,通过腹腔注射8%L-精氨酸的方法建立小鼠SAP模型。随机分为假手术组(sham)、重症急性胰腺炎组(SAP)和Tim-3阻滞组(Anti-Tim-3)。检测血清淀粉酶活性和胰腺髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性。观察胰腺组织病理学变化并进行评分。ELISA方法检测血清IL-6、IL-10、TNF-α浓度。流式细胞术检测腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMO)表面Tim-3的表达水平。RT-PCR方法检测腹腔巨噬细胞TIM-3、IL-6、IL-10、TNF-α和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)mRNA表达。Western blot方法检测腹腔巨噬细胞Tim-3、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88,My D88)和核因子κB(Nuclear FactorκB,NF-κB)p65蛋白水平。结果同假手术组相比,SAP组和Tim-3阻滞组病理评分明显升高;Tim-3阻滞组病理评分较SAP组明显升高。同假手术组相比,SAP组和Tim-3阻滞组血清淀粉酶水平明显升高。同假手术组相比,SAP组和Tim-3阻滞组中胰腺组织MPO活性明显升高;同SAP组相比,Tim-3阻滞组中胰腺组织MPO活性明显升高。与假手术组相比,TIM-3阻滞组外周血促炎细胞因子IL-6、TNF-α和抗炎细胞因子IL-10表达均明显升高;同SAP组相比,Tim-3阻滞组外周血抗炎细胞因子IL-10表达水平下降,但差异无统计学意义。RT-PCR结果显示,同假手术组、SAP组相比,Tim-3阻滞组腹腔巨噬细胞促炎因子IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平明显增高。同假手术组相比,SAP组、Tim-3阻滞组腹腔巨噬细胞中的抗炎因子IL-10 mRNA表达水平明显增高。SAP组同Tim-3阻滞组相比,腹腔巨噬细胞中的抗炎因子IL-10 mRNA表达水平无明显差异。同假手术组相比,SAP组和Tim-3阻滞组腹腔巨噬细胞TLR4 mRNA表达水平明显增高。同SAP组相比,Tim-3阻滞组腹腔巨噬细胞TLR4 mRNA表达水平增高。Western blot结果显示,与SAP组相比,Tim-3阻滞组中腹腔巨噬细胞TLR4、My D88和p65蛋白表达明显升高。结论腹腔巨噬细胞表面Tim-3通过负调节炎症因子反应来调控小鼠AP早期炎症反应。腹腔巨噬细胞表面Tim-3可能通过免疫调节TLR4/My D88-NF-κB信号通路中的TLR4、My D88和p65蛋白的表达来调控炎症因子释放,从而影响小鼠AP炎症反应。