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支原体属于柔膜体纲支原体属，个体微小且基因组也相对小。支原体无细胞壁，但它有结构复杂的细胞膜。为获得其生存必的营养物质，支原体与宿主细胞的形成了紧密的联系。另外，支原体的宿主广泛包括哺乳动物、鸟类、鱼类、节肢动物和植物。在哺乳动物中，它们通常定植呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛的粘膜表面。牛支原体是已知的对牛最重要的病原之一，它是导致奶牛乳房炎和育肥牛肺炎和关节炎的重要病原，也是导致犊牛肺炎和关节炎的重要的原因。尽管DNA重组技术能使支原体 DNA在大肠杆菌中克隆和表达，但很难将整个蛋白在其中一起表达。事实上，大部分的支原体用大肠杆菌的终止子 UGA编码色氨酸，在实验过程中，由于已知菌株 HB0801的全基因组序列，我们通过定点突变的方法将每个基因中的UGA都变为UGG，使牛支原体基因能在大肠杆菌中完整表达。通过本实验室的蛋白质组学操作工具（2-DE.MS），我们在毒力株 HB0801中鉴定出了16个抗原蛋白。 本研究的目的是克隆、表达和纯化已经鉴定的重要的免疫原性蛋白。本实验选取了5个抗原蛋白在大肠杆菌中进行克隆表达。为了使色氨酸能成功在大肠杆菌中翻译，先通过重叠延伸 PCR的方法定点将UGA突变为UGG。在这5个基因中，编码假想蛋白的Mbov_0739含有6个UGA位点，编码转酮酶基因（Mbov_0212）二氢硫辛酰、胺脱氢酶（Mbov_0106）和脂蛋白（Mbov_0579）都含有4个 UGA位点，编码二氢硫辛酰胺脱氢酶 Mbov_0312含有3个UGA位点，通过定点突变，使它们的序列能在大肠杆菌中表达。 将定点突变后的基因连接到原核表达载体上后，先转化到大肠杆菌克隆菌株DH5a中获得大量质粒，再转化到大肠杆菌表达菌株 BL21中进行原核表达。将转化大肠杆菌中的这些基因进行序列测定，鉴定正确后，用不同溶度的异丙基?-D-1-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，发现它们在12％的SDS-PAGE中有明显表达。检测它们的溶解度后，利用质粒上带有的His标签通过镍亲和层析纯化。