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目的研究NPY对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,探讨其可能的作用机制。方法1、3T3-L1前脂肪细胞的培养、诱导分化及鉴定：对3T3-L1前脂肪细胞进行复苏、培养及传代。采用传统的激素鸡尾酒诱导法诱导3T3-Ll前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。应用油红O染色显3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中的脂滴形成情况,鉴定其分化程度。2、应用不同浓度的NPY(10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、10-14M、10-15M)作用于3T3-L1前脂肪细胞24h,用MTT法检测细胞增殖情况。3、应用不同浓度的NPY(10-7M、10-9M、10-11M)干预3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化至第8天,用油红O染色、甘油三酯含量测定及脂滴计数来检测NPY对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂质合成的影响。4、采用逆转录PCR技术和实时荧光定量PCR技术检测NPY诱导3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞过程中成脂抑制因子DLK-1和关键转录因子PPAR γ的mRNA的表达水平；应用Western-blot技术检测NPY诱导3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞过程中C/EBP a、PPAR r蛋白的表达水平的变化。5、利用VVestern-blot检测NPY诱导脂肪细胞分化过程中MAPK信号通路中ERK1/2、P38、JNK蛋白水平及其磷酸化水平的变化。结果1、我们成功通过鸡尾酒诱导方案顺利诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,采用油红O染色进行鉴定。2、应用不同浓度的NPY干预3T3-L1前脂肪细胞24h后,发现生理浓度和较低浓度的NPY(<10-9M)能明显促进3T3-L1前脂肪细胞增殖；高浓度NPY(10-7M、10-8M)能抑制细胞增殖。3、应用油红O染色和甘油三酯半定量检测脂肪细胞分化过程发现：高浓度NPY主要通过增加脂滴体积明显促进脂质合成,生理浓度的NPY对脂肪细胞分化无显著作用。4、RT-PCR结果显示：NPY能在脂肪细胞分化早期抑制了DLK-1表达,高浓度NPY能增加PPARγ的mRNA水平；Western blot结果显示：高浓度NPY显著提高PPAR γ、C/EBP a蛋白水平。5、高浓度NPY诱导脂肪细胞分化时能抑制ERK1/2蛋白激酶的磷酸化、上调ERK1/2蛋白水平、P38蛋白水平,同时NPY能降低JNK蛋白水平,不过该作用可被胰岛素抑制。结论1、生理浓度及较低浓度的NPY能促进3T3-L1细胞增殖,高浓度的NPY(10-7M)抑制3T3-L1细胞增殖。2、较高浓度的NPY(≥10-9M)能促进3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞,尤以增加脂滴体积大小为特点；生理浓度及较低浓度的NPY并不能明显诱导脂肪细胞分化。3、NPY通过调节MAPK信号通路参与诱导脂肪细胞分化。