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禽白血病(Avian leukemia,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类多种良性和恶性肿瘤性疾病,临床上多以免疫抑制、生长抑制和多器官组织出现肿瘤等为主要特征,其传播主要通过垂直传播。此外,由于一些弱毒疫苗中污染了ALV也给规模化养鸡业和家禽疫苗产业带来了巨大的危害。目前尚无有效的商品化疫苗用于ALV的预防。ALV与人获得性免疫缺陷综合症病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)同属于反转录病毒,鉴于通过多种药物及其组合已经较好的控制了HIV,我们有兴趣知道类似的药物是否可以辅助降低外源性ALV的感染率或用于去除疫苗中ALV污染。本研究观察了逆转录酶抑制剂类药物拉米夫定(Lamivudine,LAM)对ALV-J在体外和体内的抑制作用并成功在模拟实验中将新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)弱毒疫苗中ALV-A污染去除。1、不同浓度LAM对ALV-J体外抑制作用及其应用首先通过在不同药物浓度培养液中细胞的连续传代和CCK-8细胞毒性测定两种方法确定了在培养液中添加不超5 ug/ml的LAM对于DF-1细胞复制没有影响。为了解不同浓度LAM对ALV-J在体外的抑制作用,实验将J亚群r NX0101株接种到DF-1细胞上,然后在不同孔中分别使用20 ug/ml,10 ug/ml,5 ug/ml,1 ug/ml LAM的维持液培养以测定病毒复制动态。结果显示,5 ug/ml的安全用药范围内,其抗病毒作用与其浓度呈正相关,即随着药物浓度的增加,r NX0101的复制受到抑制作用随之增强。按照类似操作观察了LAM对ALV-A也有明显的抑制作用。将人为污染ALV-A的NDV疫苗毒种经过5 ug/ml的LAM连续干预2代后,经接种SPF鸡、病毒分离以及核酸检测确认成功将其中人为污染的ALV去除。2、药物选择压下ALV耐药毒株的产生经细胞活性实验和对病毒的抑制作用实验确定5 ug/ml为ALV复制被显著抑制但可以继续复制的药物浓度用于构建药物选择压,在6孔细胞板中分别设置用药组和空白组。连传60代后,将原始毒株、第六十代用药组病毒及第六十代未用药组病毒进行准确定量,以相同病毒量接种细胞,分别观察同等接种剂量在添加0 ug/ml和5 ug/ml的LAM后不同毒株复制曲线,结果显示5 ug/ml药物浓度下,对原始毒株抑制作用远远高于对药物选择压下的传代毒株,证实出现了对LAM产生耐药性的ALV-J毒株。3、不同剂量LAM对ALV-J在海兰褐鸡体内复制的抑制作用给不同组别的鸡分别使用不同剂量的LAM后通过定期称重并检测针对NDV和AIV-H9的抗体评估不同剂量LAM对鸡体重和免疫功能的影响,结果显示分别使用1mg,4 mg和6 mg的药物组其体重以及AIV-H9和NDV抗体与未空白对照组相比差异均不显著。将不同组别的鸡人工攻毒后分别使用不同剂量的药物连续用药一周,从第一周起每只鸡采集抗凝血检测各组病毒血症阳性率。结果显示,未使用LAM的ALV-J感染组在感染后21 d时有85.00%转为病毒血症阳性,并且直到105 d时还维持在一个较高的病毒血症水平(65.00%),而使用4 mg LAM的感染组在63 d时即转为病毒血症阴性。使用1 mg LAM的用药组尽管没有完全消除ALV-J的感染,但病毒血症阳性率也明显低于未使用药物的感染组。综上所述,本研究不仅证实了LAM对ALV-J在体内外的抑制作用并成功应用于降低ALV-J感染和去除ALV-A污染,还构建了药物选择压下ALV-J的连续传代系列,为进一步研究逆转录病毒耐药性产生的分子机制打下来良好的基础。