全反式维甲酸对牙周炎小鼠中M2型巨噬细胞免疫状态的影响研究

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目的采用牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)涂抹小鼠口腔的方法建立牙周炎动物模型,通过体内对牙周炎小鼠进行全反式维甲酸灌胃(All-trans retinoic acid,ATRA)干预,研究ATRA对牙周炎小鼠中M2型巨噬细胞免疫状态的影响。方法选用15只7周龄C57BL/6雌性小鼠,随机分为:(1)感染对照组(Sham)(2)单纯牙周炎组(P.g+CMC)(3)全反式维甲酸处理组(P.g+ATRA)。以P.g涂抹口腔建立的牙周炎小鼠为研究对象,采用小鼠经口隔日灌胃的方式给予全反式维甲酸干预,观察P.g感染后小鼠的体重变化,于感染后的第42天取材。体视显微镜下观察小鼠大体牙周组织情况。去除软组织后,测量釉牙骨质界(Cemento-enamel junction,CEJ)到牙槽嵴顶(Alveolar bone crest,ABC)的距离评价牙槽骨的吸收情况;HE(Hematoxylin-eosin)染色法观察牙周组织中炎性浸润、附着丧失及牙槽骨吸收情况;流式细胞分析技术检测牙龈、腹腔、脾脏中F4/80+CD206+M2型巨噬细胞比例;q PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction)检测小鼠牙龈组织、腹腔、脾脏中M2型巨噬细胞相关性因子白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)的m RNA表达差异。结果(1)体视显微镜下观察结果显示:P.g+ATRA组小鼠的牙龈指数、牙齿松动度和骨吸收程度均小于P.g+CMC组(P<0.05)。(2)HE染色结果显示:P.g+CMC组结合上皮上方与牙面分离,结合上皮附着位于釉牙骨质界的根方,固有层大量的炎细胞浸润,附着丧失及牙槽骨吸收明显,可见骨吸收陷窝形成。P.g+ATRA组结合上皮相对完整,未见明显的附着丧失及骨吸收。(3)流式细胞分析技术检测结果显示:P.g+CMC组M2型巨噬细胞比例均低于Sham组,而P.g+ATRA组M2型巨噬细胞比例高于P.g+CMC组(P<0.01)。(4)qPCR检测结果显示:P.g+ATRA组牙龈、腹腔、脾脏中M2型巨噬细胞相关抑炎性因子IL-10、TGF-β1、Arg-1m RNA表达均高于P.g+CMC组(P<0.01)。结论(1)在牙周炎小鼠中M2型巨噬细胞介导的免疫应答减弱:M2型巨噬细胞比例降低。(2)ATRA有效抑制P.g诱导的牙周炎,减轻牙槽骨吸收和结缔组织附着丧失。(3)ATRA可通过增强牙龈、腹腔、脾脏中M2型巨噬细胞的免疫应答,从而缓解牙周炎症。
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