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核酸疫苗是由抗原编码基因和真核表达载体构建的重组质粒,将其导入机体后可诱导机体全面的免疫应答。与传统的蛋白免疫相比具有制作简单、经济安全、易于贮存运输等优点,自发现以来已越来越引起人们的重视,成为第三代疫苗,被广泛用于各种感染性疾病的防治研究中,我们实验室将核酸疫苗引入了性别控制领域。在性别决定和性别分化过程中,SRY/Sry基因是公认的哺乳动物性别决定基因。研究表明,基因正常表达个体就发育成雄性;相反,如果基因缺失或突变个体就发育成雌性。小鼠的性别决定发生在10.5～12.5 dpc,Sry基因也仅在此时表达。所以,性别控制可以围绕着SRY/Sry基因展开。我们实验室已经通过对小鼠进行肌肉注射Sry核酸疫苗的方法初步实现了XY胚胎向雌性反转的性别控制,获得了XY雌性个体。本实验就Sry核酸疫苗的作用途径进行了初步探索,以便对此疫苗进行更深入的研究。实验中,首先检测了核酸疫苗的体外、体内表达情况。在体外实验中,将pCR3.1-Sry瞬时转染HeLa细胞,分别用RT-PCR和间接免疫荧光法检测质粒在细胞中的表达;体内实验中,用pCR3.1-Sry肌肉注射小鼠,一周后分别提取小鼠肝脏、脾脏、肌肉、子宫组织的RNA,RT-PCR的方法检测质粒在这些组织处的表达;其次,对小鼠进行肌肉注射pCR3.1-Sry,隔一周后进行二免,二免后一周眼眶取血制备抗血清;构建pET21b-Sry重组质粒并原核表达Sry蛋白做为抗原,用夹心法ELISA对获得的抗血清进行检测。结果表明:不管在体内还是体外,核酸疫苗pCR3.1-Sry可以在真核细胞中正常表达;在肌肉注射免疫小鼠后,可以引起机体产生特异性的anti-Sry的抗体。实验结果证明:Sry核酸疫苗的确是引起了小鼠的体液免疫,其作用途径可能就是通过产生的特异性抗体与Sry蛋白结合而影响了Sry蛋白正常作用而实现性别逆转的。