禽流感病毒M2重组多肽疫苗及人角质细胞生长因子转化番茄初探

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禽流感(Avian Influenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种以侵害呼吸系统为主的高度接触性传染病。其高致病力毒株可引起90%以上的死亡率,每次爆发都给养禽业带来巨大的经济损失,因此被国际兽疫局列为Ⅰ类烈性传染病。禽流感病毒M2蛋白是由97个氨基酸组成的寡四聚体,与HA和NA基因相比,M2基因具有高度保守性。因此,与其他禽流感多肽疫苗相比,M2蛋白具有交叉保护能力的“通用”流感疫苗研究的候选抗原的优势。人角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)是由163个氨基酸残基组成的26-28 KD单链多肽。KGF对皮肤创面的上皮细胞具有促进增殖、促进创面愈合的作用,也在精囊腺、卵泡等组织、器官的发育过程中起重要作用。因此,KGF常被用于治疗胃肠系统溃疡、皮肤损伤等疾病。植物作为生物反应器应用于疫苗、抗体等药用蛋白的生产,具有经济效益高、可大规模生产、可直接食用等优点。番茄是全球种植最广泛、消费最多的蔬菜作物之一,营养丰富,是生食、熟食的美味佳品。因此利用番茄作为生物反应器生产禽流感疫苗及高活性KGF将具有重要的商业价值。本实验研究了6-BA、Zt分别与IAA组合对番茄子叶再生的影响,优化了番茄转化的方法。结果表明在Zt浓度为0.5 mg/L时番茄子叶再生芽率(93.33%)和正常芽率(36.37%)均为最高。在植物转化中,我们利用农杆菌介导的转化方法将LBM2eHBc+融合基因转入中蔬5号番茄中,获得再生无菌苗34株,经PCR检测,阳性率为75.0%。同时,我们还将KGF基因连接到表达载体pBI121中,利用农杆菌介导方法转化番茄得到再生植株12株,经PCR检测部分植株为阳性。
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