【摘 要】
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目的:探讨KIF23（kinesin family member 23）在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）中的表达及其临床意义;明确KIF23对结直肠癌细胞生物学功能的影响;进一步研究KIF23在结直肠癌中潜在作用机制。方法:生物学信息分析KIF23在结直肠癌中的表达;采用Western blot和q RT-PCR验证KIF23在本院收集的8对新鲜结直肠癌组织和配对癌旁组织中
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目的:探讨KIF23（kinesin family member 23）在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）中的表达及其临床意义;明确KIF23对结直肠癌细胞生物学功能的影响;进一步研究KIF23在结直肠癌中潜在作用机制。方法:生物学信息分析KIF23在结直肠癌中的表达;采用Western blot和q RT-PCR验证KIF23在本院收集的8对新鲜结直肠癌组织和配对癌旁组织中的表达情况;通过免疫组织化学法检测KIF23蛋白在本院收集的116例结直肠癌患者组织切片中的表达,并分析KIF23表达与患者临床病理参数的关系及预后的相关性;采用Western blot和q RT-PCR检测正常人结直肠细胞NCM460和结直肠癌细胞HCT116、Caco2、SW480、LS174T、LOVO中KIF23表达,挑出显著高表达的结直肠癌细胞系进行KIF23基因沉默,Western blot和q RT-PCR验证其沉默效果;通过CCK-8细胞增殖实验、划痕实验和Matrigel基质胶实验分别检测沉默KIF23对HCT116和SW480细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并采用Western blot验证沉默KIF23对迁移和侵袭相关基因的影响;通过KEGG通路富集分析检测KIF23与WNT通路相关性,使用皮尔森相关系数分析KIF23与WNT通路中已报道靶基因的相关性,并采用Western blot和q RT-PCR验证KIF23调控WNT通路下游基因的表达;采用Western blot和免疫荧光实验检验KIF23调节β-catenin核转位过程。结果:1.生物学信息分析表明,KIF23在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P＜0.001）;Western blot和q RT-PCR进一步验证了KIF23在8对结直肠癌组织中高表达（P＜0.001）。2.免疫组化实验提示KIF23阳性染色主要分布在细胞质;71例患者（61.2%）KIF23表达显著增高,45例患者（38.8%）KIF23呈低表达（弱阳性）或阴性表达（P＜0.05）。临床病理分析提示KIF23与T期（P=0.008）、N期（P＜0.001）、M期（P=0.013）和TNM期（P=0.001）密切相关;Kaplan-Meier生存分析提示KIF23高表达患者较低表达患者的总体生存期和无复发生存期显著缩短（P＜0.001）;Cox回归分析结果提示KIF23可作为影响结直肠癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。3.Western blot和q RT-PCR结果提示KIF23在HCT116和SW480细胞系中显著高表达;并且使用si RNA转染HCT116和SW480细胞显著沉默了KIF23的表达。4.CCK-8实验结果表明敲低KIF23表达能够显著抑制细胞的增殖能力;划痕实验表明敲低KIF23表达能够显著抑制细胞的迁移能力;Matrigel基质胶实验结果表明敲低KIF23表达能够显著抑制结直肠癌细胞的侵袭能力。Western blot结果提示敲低KIF23抑制了转移相关基因MMP2和MMP9的表达。5.KEGG富集分析结果提示KIF23与WNT通路相关,并且KIF23与大多数已报道的WNT通路下游基因表达呈正相关,包括:β-catenin,c-Myc,GSK3-β,Cyclin D1,DUT,LGR5,AXIN2和POLD3（P＜0.001,R＞0.2）。Western blot、q RT-PCR实验证明沉默KIF23可明显降低WNT通路下游靶点β-catenin和c-Myc表达。6.Western blot和免疫荧光实验结果证明KIF23沉默降低了细胞核内β-catenin的水平,增加了细胞质内β-catenin的水平。结论:显著高表达KIF23的结直肠癌患者具有更短的生存时间;进一步的研究表明,KIF23过表达通过增加β-catenin核转位能力激活Wnt/β-catenin通路,促进结直肠癌细胞恶性生物学行为。因此,检测KIF23的表达可为结直肠癌的临床诊断、治疗及预后评估提供新的实验依据。
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自我革命是中国共产党跳出治乱兴衰历史周期率的第二个答案，在推进中国革命、建设、改革和复兴伟业的百年征程中积累了宝贵的历史经验：以坚持党的全面领导与人民至上相统一为根本遵循；以坚持问题导向和使命引领相促进为内在动力；以坚持真理与修正错误相统一为鲜明特质；以坚持发扬革命精神与树立底线思维相结合为思维方法。新时代继续推进党的自我革命，要在自我革命引领社会革命的进程中保持笃定初心使命的定力，在问题导向与目