上海、广州等地市售与上海入境黄鳝、泥鳅中颚口线虫调查与分类鉴定

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颚口线虫是一种食源性人畜共患寄生虫,由该虫引起的人体病例呈世界性分布,其对人类健康的危害不容小觑。而在我国对颚口线虫病缺乏相应的重视,也尚未有本病相关的防疫标准规定,使人类的公共卫生安全受到威胁。因此,本研究随机调查了我国上海、广州等地市售部分水产品中颚口线虫的感染情况,查清危害我国食品安全的主要颚口线虫虫种,旨在为本病的防治以及该虫的进一步研究提供新的依据及思路。本研究调查了国内7个省市颚口线虫11种中间宿主,除了黄鳝、泥鳅外,其余品种的淡水鱼样本数量较少,且未检出阳性结果,不具有统计学意义,因此将黄鳝与泥鳅的感染情况作为本次调查的描述重点。本次调查在上海、广州、南宁黄鳝和广州、黑龙江泥鳅中发现颚口线虫第三期幼虫,其中广州的黄鳝感染率最高,为14%。另外,对上海进境的来自3个国家的14批黄鳝进行颚口线虫检疫,其中有12批黄鳝检出颚口线虫第三期幼虫,均来自菲律宾和印度尼西亚。并且印度尼西亚黄鳝的平均感染率最高,为63.9%,检出颚口线虫总数最多,但菲律宾黄鳝平均感染强度较印度尼西亚稍高。为了鉴定所检获的颚口线虫所属虫种,本研究通过对颚口线虫进行光学显微镜和扫描电镜的观察,测量及分析虫体形态特征数据。初步确定广西疾病预防控制中心(CDC)提供的福建野猪中检出的颚口线虫为杜氏颚口线虫(G. doloresi)成虫;黑龙江与广州泥鳅中检出的颚口线虫为日本颚口线虫(G. nipponicum)早第三期幼虫;上海黄鳝中检出的为刚刺颚口线虫(G. hispidum)晚第三期幼虫;南宁、广州、菲律宾黄鳝中检到的均为棘颚口线虫(G. spinigerum)晚第三期幼虫;印度尼西亚黄鳝中的颚口线虫多数为棘颚口线虫(G. spinigerum)晚第三期幼虫,有1条日本颚口线虫(Gnipponicum)晚第三期幼虫,2条刚刺颚口线虫(G. hispidum)晚第三期幼虫。其次,运用PCR方法扩增了已经进行形态观察的颚口线虫以及由吴慧芳在2009年搜集的宜州棘颚口线虫三期幼虫的核糖体核酸内转录间隔2基因(rDNA-ITS2)和部分线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因(COl),并测序进行序列分析。发现序列分析的结果与形态学鉴定预期的结果一致,进一步证实鉴定结果的准确性。并且分析两个基因的特征,发现颚口线虫ITS2基因种间差异较大适合用作虫种鉴定,CO1基因种内差异较明显,可用于颚口线虫种内基因变异的研究。棘颚口线虫(G.spinigerum)CO1基因呈现至少4种基因型,从表面看分型跟地理分布并没有明显的关系,但可以看出印度尼西亚、菲律宾、越南以及中国两广地区的棘颚口线虫关系都较近。刚刺颚口线虫(G. hispidum) ITS2与CO1基因明显呈现2种差别较大的基因型。颚口线虫ITS2与COl基因序列上的差异与形态上的差异无关。最后,利用颚口线虫ITS2基因的差异性,首次以ITS2为目的基因对棘颚口线虫、杜氏颚口线虫、日本颚口线虫3种颚口线虫设计特异引物并建立多重PCR鉴定虫种的方法,国内外目前尚未有相关的文献报道。经验证该方法简单、快速,特异性强,重复性高,仅通过条带的位置就可以判定所属的虫种,不需要进行测序等繁琐费时的步骤。为今后建立更完善的颚口线虫多重PCR虫种鉴定方法奠定了基石。
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