栀子DNA条形码及HPLC指纹图谱研究

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在动植物检验事业、法医物证鉴定、物种系统发育、疾病诊断等研究中,不知道来源的生物检材的种属鉴定是一个重要的鉴定环节,传统的物种鉴别方法依赖于形态学方法、解剖学方法及化学分析法,但由于环境因素的影响以及生物发育不同阶段的差异,这些方法显示出了局限性,为了克服这些缺点,许多基于基因分型的分子鉴别手段相继问世。本文通过以国际通用的植物DNA条形码引物(ITS2、matK、rbcL及psbA-trnH)构建了栀子的DNA条形码,并建立了HPLC化学指纹图谱,以便对栀子从多方面进行鉴别,以期对栀子药用品种选育提供依据,进行规范,并取得如下结果:1、根据田间观察,针对植株形态、叶片形态、果实形态、颜色等性状的差异,在国内主要栀子产区湖南、江西、重庆等地采集栀子果实和叶片,对果实的形态特征进行了比较。2、通过试剂盒法提取栀子叶尖DNA,以ITS2、matK、rbcL及psbA-trnH四种引物分别进行PCR扩增,再将扩增产物进行检测,通过分析表明:rbcL扩增产物可以作为表征栀子的一级条形码,matK、ITS2、psbA-trnH扩增产物分别作为二、三、四级条形码,对栀子种群进行逐级细分,反映了栀子种群的遗传多样性。3、将栀子果实干燥、粉碎后过40目筛,将甲醇提取液进行HPLC指纹图谱的检测,结果表明:不同栀子药材的指纹图谱共有峰的相对保留时间(t)基本一致,反映栀子药材所含的主要成分是相似的,但相对峰面积(A)有一定的差异,反映了不同栀子药材主要成分含量的差异性。20种栀子药材中的18种HPLC指纹图谱的相似度在0.9以上,其中S15和S19相似度较低,相似度只有0.843和0.656。聚类分析结果与相似度分析结果一致。4、栀子DNA条形码信息反映了栀子种群遗传的共性和多样性特征,栀子药材HPLC指纹图谱信息反映了栀子种群化学成分的共性和差异性;作为药材使用的栀子,首先要求物种的遗传稳定性;药材的道地性是建立在遗传稳定的种质材料在不同生境条件下的化学成分的优化,以发挥最佳的药效;因此,通过DNA条形码和HPLC指纹图谱信息开展基于“图-码”结合的栀子品种选育与道地药材品质的控制具有很好的指导意义。
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