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本研究针对基因Ⅳ型HEV基因组ORF3设计特异性的引物和探针,建立了从猪粪便中定量检测基因Ⅳ型HEV的real-time RT-PCR方法。该方法标准曲线的相关系数和斜率分别为0.994和-3.312,并且具有较好的重复性、特异性和灵敏性。所建立的real-time RT-PCR方法能够准确的从阳性基因Ⅳ型HEV毒株中检测到病毒核酸。为基因Ⅳ型戊型肝炎病毒的分子生物学检测奠定基础。在参考相关文献的基础上,通过生物信息学软件分析了基因Ⅳ型HEV CH-S-1毒株基因序列和氨基酸序列,结果表明基因Ⅳ型HEV CH-S-1毒株与CH-87毒株核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为92.5%和100%。基因进化树分析结果发现CH-S-1毒株与CH-87毒株在同一分支上,属于基因Ⅳ型Ⅳa亚型。HEV优势抗原表位的预测结果表明HEV ORF2 424~563aa和613~674aa区段绝大部分位于该蛋白表面,而235~372aa区段有部分包裹在所分析蛋白内部。因此本研究初步将ORF2蛋白382~674aa区域(p293)作为HEV优势抗原表位相对集中的区域做进一步研究。通过设计特异性的引物,扩增了ORF2基因截短体293(6286bp~7167bp)并且成功构建了毕赤酵母分泌表达重组质粒pPIC9K-293。重组菌经Muts表型筛选和PCR鉴定后,成功筛选到了阳性重组酵母菌GS115/pPIC9k-293。目的蛋白SDS-PAGE的检测结果可见与预期大小一致的目的带,目的蛋白p293占培养物上清中可溶蛋白的15.7%。Western Blot结果表明目的蛋白具有较好的抗原性。在对诱导表达条件优化后发现,目的蛋白的表达量显著提高。硫酸铵沉淀、透析纯化浓缩目的蛋白,SDS-PAGE分析表明,纯化浓缩后的目的蛋白占总蛋白的85%,约为80mg/L。在透射电镜下观察目的蛋白p293,可见大小为30nm左右的病毒样颗粒。研究结果为HEV血清学诊断方法以及疫苗的相关研究奠定了基础。