目的:利用同位素标记技术,对[14C]SHR1258的非临床药代动力学进行研究,了解SHR1258的药动学特征,明确其体内过程,解释非放射性药动学实验中低回收率现象,完善同位素标记药物的药动学实验方法和相关检测方法,为同位素标记药物在临床药代动力学研究中的应用提供基础。方法:(1)吸收研究:建立血浆中SHR1258的高效液相色谱(LC-MS/MS)检测方法,测定单剂量口服非放射性标记SHR1258的大鼠血浆中原型药的浓度,确定药物-浓度曲线及药代动力学参数;同时,以液体闪烁计数仪(LSC)测定单剂量口服[14C]SHR1258的大鼠血浆的总放射性,确定放射性总浓度-时间曲线及药代动力学参数,比较其药代动力学差异。(2)排泄研究:利用LSC测定其放射性活度以评价药物的体内排泄。收集单剂量口服[14C]SHR1258大鼠的粪便和尿液样本,测定不同时间段排泄物中放射性强度,根据总放射性强度获得药物及其代谢产物的排泄情况,明确SHR1258的主要排泄途径,获得物质平衡信息。(3)代谢研究:利用LC-MS/MS联用同位素在线/离线检测,对粪便、胆汁、尿液和血浆样本进行检测,确定各样本中[14C]SHR1258的代谢物谱,对各代谢物分别定量;同时串联质谱分析,在线确定其相对分子质量和主要离子碎片,对主要代谢产物进行结构鉴定。结果:(1)吸收研究:SHR1258非放射性药代动力学参数(t1/2=3.80 h、V=208 L、CL=38 L、AUC=4478 ng·h/mL)与放射性药代动力学参数(t1/2=5.21 h、V=197 L、CL=26 L、AUC=11990ng·h/mL)有较大差异:总放射性半衰期有所延长,体内暴露量也明显增大。提示循环中除了原药SHR1258外,可能存在其他消除较慢的代谢产物。(2)排泄研究:[14C]SHR1258在0-48 h内粪便中放射性排泄率高于90%(约占92%),尿液中较低(少于1%),在给药后第三天(48-72 h)和第四天(72-96 h)时尿液和粪便的放射性总量均小于放射性给药剂量的1%,提示SHR1258在48 h内主要经粪排泄。(3)代谢研究:共鉴定出除原型药M0以外的22种不同的代谢产物:检测到大鼠粪便样本中15种代谢产物,胆汁样本中15种代谢产物,血浆样本中6种代谢产物,主要代谢产物均为四氢吡咯环羰基化产物(M5),分别占各自样本放射性色谱峰面积的19.27%、16.40%和21.02%;尿液样本中共检测到6种代谢产物,主要代谢产物为单氧化产物(M6-1),占尿液样本放射性色谱峰面积的57.89%。利用同位素标记技术与LC-MS/MS联用实现对SHR1258代谢产物的分别定量和结构鉴定。结论:本研究中,利用放射性同位素标记技术,更为准确地了解SHR1258 口服吸收的过程;获得SHR1258及其相关代谢产物的在体内的排泄信息和特征;简便高效实现对代谢产物的分别定量和结构鉴定。