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目的探索适宜的金黄色葡萄球菌生物膜(S.aureus BF)建模方法,为研究脱管散对其干预作用提供模型,探讨脱管散对S.aureus BF的抑制破坏作用。方法将金黄色葡萄球菌(ATCC25933)细菌进行复苏、接种、传代、培养等制成浓度为1.5×109cfu/ml的标准菌液。24孔板培养番红染色法初步定性S.aureus BF的形成。以直径8mm细胞爬片为载体,用LB肉汤培养,每日换液,4日后扫描电镜观察进一步明确菌株能够形成BF,不同倍数下S.aureus BF行形态学观察。以直径8mm细胞爬片为载体用4种不同浓度脱管散作用于成熟的BBF 4天后,确定脱管散对S.aureus BF作用的适宜浓度。分为空白组、脱管散不同浓度组,于建模3d开始使用脱管散,用药4d后采用连续活菌计数法测定活菌数量,行统计学分析。以直径8mm细胞爬片为载体扫描电镜动态观察S.aureus BF 6d的生长趋势及每天使用万古霉素(VAN)作用后的对BF的影响。然后分为空白组和万古霉素组后结晶紫染色,酶标仪动态测定光密度值绘制S.aureus BF生长曲线及VAN作用后的生长曲线。分为空白组、万古霉素组、脱管散组,以细胞爬片为载体,24孔板培养以第4天、第7天按需留取标本,经处理后扫描电镜观察对比VAN、脱管散对S.aureus BF生成的抑制作用。分为空白组、中西结合组(万古霉素组联合脱管散)、脱管散组,以细胞爬片为载体,24孔板培养,各组自48h后开始用药,在用药后第4天、第7天按需留取标本,经处理后扫描电镜观察对比中西结合、脱管散对成熟S.aureus BF的破坏作用。结果1.采用24孔板对S.aureus培养4天后行番红染色形成肉眼可见的片状红色物质初步定性为生物膜形成。2.以细胞爬片为载体,培养4天后,经冲洗去除浮游菌、乙醇梯度脱水、醋酸异戊酯置换、二氧化碳临界点干燥仪进行二氧化碳临界点干燥、粘台、HCP-2离子溅射仪喷金等处理后行扫描电镜检测,可见膜状BBF的形成,并在不同倍数下观察生物膜的形态。3.脱管散对S.aureus BF作用的最适浓度:对成熟的S.aureus BF使用脱管散4d后,0.1g/ml浓度组细菌数量较少且无生物膜形成。4.脱管散对S.aureus BF作用后的连续活菌计数比较:在使用不同浓度脱管散4天后,连续活菌计数,脱管散不同浓度组活菌数量明显少于空白对照组(p<0.05)。5.S.aureus BF生长趋势及万古霉素(VAN)作用后的影响:扫描电镜及酶标仪测光密度值,动态观察空白组S.aureus BF自第1天开始增多,到第4天达高峰后又开始逐渐减少,万古霉素组在使用万古霉素后第1天BBF迅速增加到顶峰,之后逐渐下降,细菌生物膜逐渐减少。6.脱管散对S.aureus BF的抑制作用:无论培养4天、还是7天,万古霉素组都有生物膜存在,但7天时量较少;脱管散组均无生物膜存在,且细菌数量稀少。7.脱管散对S.aureus BF的破坏作用:对成熟的S.aureus BF中西结合组在用药后4天生物膜存在,但7天时量减少;而脱管散组在用药后4天、7天均无生物膜存在,且细菌数量稀少。结论脱管散在体外可以抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成、破坏已形成的成熟金黄色葡萄球菌生物膜。